DB34/T 3861-2021 畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测定 高效液相色谱法

ICS01.120

CCSA00

34

安徽省地方标准

DB34/T3861—2021

畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测

定高效液相色谱法

DeterminationofAFB1biomarkerinserumhighperformanceliquid

chromatographicmethod

2021-01-25发布2021-02-25实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3861—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽农业大学提出。

本文件由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司（农业农村部猪肉质量安全控制重点实验

室）、望江县小月山农业发展有限公司、和县农业农村局、望江县畜牧兽医局、安徽省动物疫病预防与

控制中心、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、宿松县春润食品有限公司。

本文件主要起草人：王希春、杨长根、陈祥国、赵家喜、沈艳、高亚飞、王军、汤继顺、赵杰、吴

金节、李玉、冯士彬、孙裴、涂健、冯江华。

I

DB34/T3861—2021

畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测定高效液相色谱法

1范围

本文件确立了畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物含量的高效液相色谱法测定方法，并规定了测定

原理、试剂和设备、测定步骤、测定结果的表述、重复性、检出限与定量限、回收率。

本文件适用于畜禽血清中AFB1生物标志物的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

黄曲霉毒素B1AflatoxinB1，AFB1

主要由黄曲霉与寄生曲霉代谢产生的一种真菌毒素，进入体内以后会与血液白蛋白中的赖氨酸

（Lysine）结合形成稳定的生物标志物AFB1-Lysine。

4原理

通过蛋白酶的消化，从血清白蛋白中释放出AFB1生物标志物，采用固相萃取柱浓缩。浓缩的AFB1

生物标志物经高效液相色谱仪分离，用荧光检测器检测。

5试剂和设备

5.1试剂与材料

5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.2蛋白酶。

5.1.3磷酸二氢铵（NH4H2PO4），分析纯。

5.1.4叠氮化钠（NaN3），分析纯。

5.1.5白蛋白试剂（DMA）：生物试剂。

5.1.6蛋白检测染料试剂浓缩液（考马斯亮蓝G-250）

5.1.7氯化钠（NaCl），分析纯。

5.1.8磷酸氢二钠（Na2HPO4），分析纯。

5.1.9磷酸二氢钾（KH2PO4），分析纯。

1

DB34/T3861—2021

5.1.10氢氧化铵（NH4OH），分析纯。

5.1.11甲酸（HCOOH），分析纯。

5.1.12AFB1生物标志物标准品AFB1-Lysine（纯度≥99％）。

5.1.13除另外说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的一级水。

5.2仪器与设备

5.2.1高效液相色谱仪（含荧光检测器、柱温箱）。

5.2.2水浴恒温摇床。

5.2.3固相萃取柱（1cc/30mg）。

5.2.4粒径5µmC18高效液相色谱柱（Ø250×4.6mm）。

5.2.5涡旋振荡器。

5.2.6微量进样器。

5.2.7天平（感量0.0001g）。

5.2.8pH计。

5.2.9-80℃超低温冰箱。

5.2.10冷冻离心机：转速≥3500g。

5.2.11紫外分光光度计。

6测定步骤

6.1样品制备

无菌采集新鲜血液5mL，室温静置2h，2000g离心15min，取上清液转移至另一离心管中。

6.2总蛋白及白蛋白含量测定

6.2.1血清总蛋白浓度测定

6.2.1.14℃下精密称取1mg/mL蛋白标准品置于玻璃管中用于制备标准曲线，各管添加量见表1。

表1血清总蛋白标准曲线绘制

标准溶液水标准

序号

(μL)(μL)(μg)

1