DB15/T 2594-2022 紫花苜蓿组织培养技术规程

ICS65.020.20

CCSB21

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2594—2022

紫花苜蓿组织培养技术规程

Technicalcodeofpracticefortissuecultureofmedicagosativa

2022-06-24发布2022-07-24实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2594—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。

本文件起草单位：中国农业科学院草原研究所、内蒙古农业大学。

本文件主要起草人：徐春波、王勇、赵海霞。

I

DB15/T2594—2022

紫花苜蓿组织培养技术规程

1范围

本文件规定了紫花苜蓿组织培养的术语与定义、培养基、外植体、愈伤组织诱导培养、增殖培养、

分化培养、生根培养、炼苗与移栽等基本内容及技术要求。

本文件适用于紫花苜蓿组织培养育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

DB15/T1940西部沙樱组织培养技术规

3术语和定义

NY/T2306界定的术语和定义适用于本文件。

紫花苜蓿medicagosativaL.

属于豆科（Leguminosae）苜蓿属（Medicago）多年生草本植物。

4环境与器具灭菌

按照DB15/T1940操作。

5培养基

基本培养基

MS培养基、1/2MS、改良SH培养基和MSO培养基见附录A。

母液的配制和保存

5.2.1配制

将常用试剂配制成50～100倍的母液，严格按照GB/T603规定方法配制。所用激素均配制浓度为0.5

mg/mL，配制方法详见附录B。

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DB15/T2594—2022

5.2.2保存

母液配制好分别贴上标签，注明溶液名称、配制倍数、配制日期、配制者。母液贮存在4℃的冰箱

中。贮藏时间在3个月之内，有霉菌和沉淀产生，则不准许使用。

培养基的配制

5.3.1配制

配置1L培养基时，先加蒸馏水600ml～700ml，再加入7.5g琼脂，加热搅拌琼脂融化后加入25g

蔗糖，搅拌溶解后再分别加入母液，搅拌均匀，加蒸馏水定容至1L。

5.3.2pH值调节

用1mol/L的NaOH将配制好的培养基调到pH值5.8～6.0，用酸度计或精密pH试纸测定。

5.3.3分装和灭菌

配制好的培养基趁热分装。分装量以占培养容器的1/4～1/3为宜。切勿将培养基沾到瓶口和外壁上，

以免招致杂菌污染。分装后立即加盖，不同的处理做好标记。分装后进行灭菌，121℃状态下保持20min。

6外植体

无菌苗的培养

紫花苜蓿种子用75%的酒精灭菌3min～5min，无菌水冲洗，再用10%次氯酸钠消毒10min～15min，

无菌水冲洗5～6次后用灭菌的滤纸吸干种子表面的液体，接种到1/2MS培养基上。

外植体的选择和制备