T/CMBA 020-2023 人正常乳腺及乳腺癌类器官制备、冻存、复苏和鉴定操作指南

ICS11

CCSC05

T/CMBA

团体标准

T/CMBA020—2023

人正常乳腺及乳腺癌类器官制备、冻存、复

苏和鉴定操作指南

Guidelineforpreparation,cryopreservation,recoveryandidentificationoforganoids

ofhumannormalbreastandbreastcancertissue

2023-2-21发布2023-2-21实施

中国医药生物技术协会发布

T/CMBA020—2023

目次

前言................................................................................I

引言...............................................................................II

1范围................................................................................1

2规范性使用文件......................................................................1

3术语和定义..........................................................................1

4通则................................................................................2

4.1方案制订.........................................................................2

4.2知情同意.........................................................................2

5类器官制备..........................................................................2

5.1组织样本采集.....................................................................2

5.2组织样本的保存和运输.............................................................2

5.3类器官制备、培养和传代...........................................................2

6类器官冻存和复苏....................................................................3

7类器官鉴定..........................................................................3

8数据管理............................................................................3

9废弃物处理..........................................................................3

10质量控制............................................................................3

附录A（资料性）人正常乳腺及乳腺癌类器官制备、冻存和复苏操作要点.....................4

A.1仪器设备及试剂耗材...............................................................4

A.2人正常乳腺及乳腺癌类器官制备操作步骤.............................................5

A.3人正常乳腺及乳腺癌类器官冻存和复苏核心步骤.......................................6

附录B（资料性）人正常乳腺类器官和乳腺癌类器官的鉴定.................................7

B.1概述.............................................................................7

B.2类器官显微镜下的形态学观察.......................................................7

B.3类器官细胞活性分析...............................................................7

B.4类器官组织学特征分析.............................................................7

B.5类器官分子分型鉴定...............................................................8

参考文献..........................................................................10

T/CMBA020—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的

规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国医药生物技术协会提出并归口。

本文件起草单位：四川大学生物治疗国家重点实验室、四川大学华西医院、广州精科生物技术

有限公司、成都诺医德医学检验实验室有限公司、中国医学科学院肿瘤医院、中科院分子细胞科学

卓越创新中心、广东省人民医院、中山大学肿瘤防治中心、广东医科大学附属医院、北京大学深圳

医院、深圳市第二人民医院、川北医学院、华南理工大学、佛山市第一人民医院。

本文件主要起草人：魏于全、陈崇、李胜、苟马玲、高栋、罗健、马飞、张柏林、王坤、王树

森、谢小明、杜正贵、陆政昊、李宏、刘佳、吴晴、薛晓红、陈伟财、韦伟、何劲松、马代远、梁

法清、张清、李杰、张英、黄胜超、吴艳霞、罗云峰、张爱玲、张永成、曾志强、罗微、胥正敏、

王瑶。

I

T/CMBA020—2023

引言

乳腺癌是最常见的恶性肿瘤。利用类器官体外培养技术开展乳腺癌基础研究和临床治疗学研究

具有重要的学术价值。类器官可在体外较好地模拟体内肿瘤的特征，为乳腺癌的基础研究、精准治

疗和新药研发等提供新的技术手段。由于类器官的研究及应用涉及多个技术流程，影响因素多，开

发难度大，特别是类器官的制备、冻存和复苏、鉴定等操作过程复杂。目前，国内对正常乳腺及乳

腺肿瘤类器官制备、培养和鉴定等操作尚未建立规范标准。为此，特组织编写《人正常乳腺及乳腺

癌类器官制备、冻存、复苏和鉴定操作指南》，以利于推动和指导类器官构建的相关研究,辅助研究

人员开展乳腺癌致病机制、药物筛选和肿瘤治疗等相关研究，规范并引导行业发展。

II

T/CMBA020—2023

人正常乳腺及乳腺癌类器官制备、冻存、复苏和鉴定操作指南

1范围

本文件给出了人正常乳腺及乳腺癌组织类器官制备、传代、冻存、复苏和鉴定等的规范性操作

和推荐方法。

本文件适用于科研院所、医疗机构、制药企业等构建人源正常乳腺及乳腺癌组织类器官。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB19489—2008实验室生物安全通用要求

GB39707—2020医疗废物处理处置污染控制标准

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

人正常乳腺类器官humannormalbreastorganoids

人体正常乳腺上皮组织中的上皮干细胞或者多能干细胞经体外诱导分化，在有支架材料的培养

条件下形成的与人正常乳腺上皮组织的细胞成分、组织结构及功能等关键特征具有相似性的三维多

细胞培养物。

3.2

人乳腺癌类器官humanbreastcancer-derivedorganoids

由人乳腺上皮癌变组织来源的肿瘤干细胞，在有支架材料的培养条件下形成的与其来源组织的

细胞成分、组织结构及分子表型等关键特征具有相似性的三维多细胞培养物。

3.3

支架材料scaffoldmaterial

用于辅助或支撑类器官体外培养的生物材料，包括天然材料如基质凝胶和合成材料。

3.4

传代passage

将类器官制备为单细胞或细胞簇后再进行培养形成新的类器官的过程。

3.5

冻存cryopreservation

将类器官经低温冷冻处理后在低温环境下长期保存并保持类器官细胞活力的技术。

3.6

1

T/CMBA020—2023

复苏recovery

将冻存的类器官解冻后进行培养,恢复类器官细胞组织活性的过程。

4通则

4.1方案制订

人正常乳腺类器官和人乳腺肿瘤类器官研究项目启动前应当制订工作方案。工作方案的内容包

括但不限于：目标与任务、操作流程、工作条件、生物安全等级、操作人员资质、供体选择要求、

类器官质量控制标准、参考文献等。供体选择要求中，建议将乳腺的生理特征及乳腺癌的治疗方法

与用药史等情况纳入重要考虑因素。

4.2知情同意

人体正常乳腺组织及乳腺癌组织的获取方法、处理手段、保存条件、使用目的等内容需获得伦

理委员会审核批准，宜在充分尊重、告知人体组织提供者权益的前提下签署知情同意书，告知内容

包括但不限于：组织的处置方案及可能涉及的应用场景。宜对组织提供者的个人信息进行隐私保护，

严禁泄露可识别供体及亲属身份的信息，如：姓名、肖像、证件、社会关系等。

5类器官制备

5.1组织样本采集

5.1.1应当建立相应的生物安全管控体系及使用规范，严格控制因直接或间接接触人类组织样本引

起重大疾病传播的风险。

5.1.2供体组织应当由医疗机构提供，乳腺癌组织样本可从通过穿刺或手术等手段获得的人体乳腺

癌组织中选取，取样时应避免坏死区域；正常乳腺组织样本可通过乳腺相关手术治疗过程中切除的

人体乳腺组织中获取；组织离体后宜尽快完成样本采集。

5.1.3组织样本的采集人员需有相关专业的学习背景或培训经历。

注：除所用的培养基外，正常乳腺类器官和乳腺癌类器官的培养流程相同。

5.2组织样本的保存和运输

采集的组织样本应完全浸没于无菌的组织保存液中，应于低温（0℃～4℃）条件下进行保存和

运输，应避免保存液和其中的组织样本冻结。

所