WS/T 327-2011 消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求

ICS11.080

C59

中华人民共和国卫生行业标准

/—

WST3272011

消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求

Reuirementsofmcobactericidalevaluation

qy

fordisinfectantinlaborator

ㅤㅤㅤㅤy

2011-04-12发布2011-09-30实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

WST3272011

消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求

1范围

、、

本标准规定了消毒剂杀灭分枝杆菌实验的试剂与仪器菌悬液和菌片的制备定量杀灭试验和评价

方法。

本标准适用于评价各种消毒剂对分枝杆菌的消毒效果。

本标准不适用于评价临床使用的治疗性药物对分枝杆菌杀灭效果。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/、

食品卫生微生物学检验染色法培养基和试剂

GBT4789.28

GB15981消毒与灭菌效果的评价方法与标准

消毒技术规范中华人民共和国卫生部

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

《》。

消毒技术规范中确立的有关定义和术语适用于本文件

4试剂与仪器

4.1试验菌株

龟分枝杆菌脓肿亚种()()。

CMCCB93326ATCC19977

4.2培养基

4.2.1分枝杆菌干燥培养基。

()。

4.2.2改良罗氏培养基见附录A

()。

4.2.3苏通综合培养基见附录A

4.3其他试剂

()。

中和剂根据消毒剂种类选择并经中和剂鉴定试验见附录合格者

4.3.1B

()。

稀释液含胰蛋白胨的生理盐水见附录

4.3.20.1%A

()。

4.3.3标准硬水见附录A

()。

4.3.4有机干扰物见附录A

4.4仪器设备

4.4.1恒温培养箱。

4.4.2恒温水浴箱。

1

/—

WST3272011

4.4.3计时器。

4.4.4电动混和器。

刻度吸管(、、)或移液器。

4.4.50.1mL1.0mL5.0mL

生物安全级实验室()。

4.4.6ⅡBSL-2

5龟分枝杆菌脓肿亚种菌悬液和菌片的制备

5.1菌悬液的制备

,,(/,

5.1.1取冻干菌种管以无菌操作打开用毛细吸管吸加适量营养肉汤应符合GBT4789.28要求

),,。

见附录于管中轻柔吹吸数次使菌种融化分散取含营养肉汤或苏通综合液体

A5.0mL~10.0mL

,,。

培养基试管滴入少许菌种悬液置培养用接种环取第代培养的菌划线接种于商

37℃18h~24h1

,。,

品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基平皿上于培养挑取上述第代培养物中典型菌落接

37℃72h2

,,。,

种商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基斜面于培养即为第代培养物密封后在保

37℃72h34℃

,。

存时间不超过周

6

,,

试验时取第代斜面培养物在商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基斜面上连续传代培养方

5.1.23

。,

法与第代相同取第代第代的新鲜培养物用吸管吸取稀释

35~672h5.0mL3.0mL~5.0mL

,,。,

液加入斜面试管内反复吹吸洗下菌苔随后用5.0mL吸管将洗液移至一含有6~7玻璃珠的

gg

,。。

无菌圆锥底试管中用电动混合器混合至少5min然后将菌液吸入到另一试管内制成菌悬液菌悬

。。

液保存在4℃冰箱内备用当天使用不得过夜

,,(

5.1.3将制成的菌悬液进行活菌培养计数按其结果用稀释液稀释至所需浓度悬液定量杀灭试验时

回收菌数为7/7/)。

ㅤㅤㅤㅤ

1×10CFUmL~5×10CFUmL

()

5.2染菌载体菌片的制备

5.2.1载体

,、、、、。

5.2.1.1载体应根据消毒对象选择常用的有金属玻璃滤纸线棉布等根据消毒对象选择适宜材

。,。,

料载体作为代表载体可以为方形大小为10mm×10mm当以金属片为载体时可用12mm直径

()。

圆形金属片厚0.5mm

(),。:

5.2.1.2所用载体除滤纸片外于染菌前应进行脱脂处理脱脂方法如下

)将载体放在含洗涤剂的水中煮沸;

a30min

)以自来水洗净;

b

)用蒸馏水煮沸;

c10min

)用蒸馏水漂洗至呈中性;

dpH

)、。

e晾干熨平备用

。,,

5.2.1.3布片用白平纹棉布制作在剪开前先将脱脂的布块按载体规定的大小抽去边缘一周的经

,。,。,

纬纱各一根再按抽纱痕剪开此法制成的载体大小一致且无毛边金属片以不锈钢制作纸片以新

华滤纸制作。

,。

5.2.1.4载体经压力蒸汽灭菌后使用滴染法染菌

5.2.2菌片的制备

,8/9/

取上述5.1.2所获得的龟分枝杆菌脓肿亚种菌悬液用稀释液稀释至2×10CFUmL~1×10CFU

,,,,,

mL然后取菌悬液1mL加入有机干扰物1mL混匀取10L滴染于灭菌载体上于37℃培养箱或

μ

。6/6/。

室温自然干燥即可活菌培养计数结果回收菌数应满足片片

1×10CFU~5×10CFU

2

/—

WST3272011

6龟分枝杆菌脓肿亚种定量杀灭试验

6.1试验分组

,,。

6.1.1试验组即预先设定的消毒剂量组即选定消毒剂浓度与作用时间

,,。