T/YEMS 001-2023 基因组健康评价技术规范

范围:基因组稳定是健康促进、利好公众健康素质的基础遗传学要素。基因组损伤是基因组健康受到胁迫的生物学标识。 本文件规定了人体基因组损伤微创检测的细胞分子生物学原理与技术、操作规范。 本文件适用于以人体基因组健康评价为基础的遗传健康咨询，为构建健康管理、健康生活方式和公共卫生策略为特征的“零级预防”提供科学依据; 主要技术内容:1 微创外周静脉血取样：采样需经伦理审查和知情同意，受检人应需提供近三个月内的HBV、HCV、HIV和梅毒检测报告，上述任一病原体阳性者暂不参与本项健康评价分析。资质人员以肝素钠抗凝采集3ml，48小时内完成淋巴细胞分离培养、核基因组DNA提取。2 淋巴细胞培养及制片2.1 培养基质量要求：淋巴细胞培养使用标准RPMI1640培养基，含10%胎牛血清、2mM L-Glu、30μg/mL植物血球凝集素、1mM丙酮酸钠和100 IU/mL双抗，无菌分装，4℃避光保存，一周内使用。2.2 淋巴细胞分离和计数质量要求：外周静脉血样于室温（15-28℃）下经HBSS稀释根据淋巴细胞分离液说明分离出淋巴细胞，HBSS清洗三次，1000rpm离心10min，计数。2.3 细胞培养、细胞质分裂阻断与制片：将淋巴细胞接种于含800μL RPMI1640培养液的10ml圆底无菌试管中使其终浓度达到0.5×106个/mL，37℃、5% CO2培养箱中培养44小时，4.5μg/ml细胞松弛素B阻断细胞质分裂28小时，淋巴细胞分离及培养全程无菌操作。培养毕以涂片离心机制片；常规固定、染色及封片。3 端粒长度分析：取6.1全血利用天根生化科技（北京）有限公司基因组DNA提取试剂盒（血液/细胞/组织）提取核基因组DNA，以RT-qPCR标准曲线法测量平均端粒长度。3.1 标准品制备：以14个TTAGGG重复序列制备端粒标准品，度量样本端粒总长度，选单拷贝基因36B4序列制备单拷贝基因标准品，度量样本基因组倍数。3.2 平均端粒长度分析：设定RT-qPCR标准曲线程序，RT-qPCR反应结束后，依据标准曲线得到目标样本的端粒总长度T（kb/reaction）和基因组拷贝数S（基因组拷贝数/reaction），二者的比率（T/S）即为样本单个基因组的端粒总长度（TL/diploid genome，Kb），除以染色体总数后得到样本的平均端粒长度（Kb）。4 基因组损伤判断标