GB/T 19915.6-2005 猪源链球菌通用荧光PCR检测方法

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中华人民共和国国家标准

GB/T19915.6-2005

猪源链球菌通用荧光PCR检测方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionofStreptococcussuis

2005-09-27发布2005-11-01实施

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GB/T19915.6-2005

目U胃

本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。

本标准由国家标准化管理委员会提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中国兽医药品监察所。

本标准主要起草人：张鹤晓、宋立、高志强、宁宜宝、周琦、乔彩霞、杨承槐、吴丹、谷强。

本标准系首次发布的国家标准。

GB/T19915.6-2005

猪源链球菌通用荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪源链球菌通用荧光PCR检测方法。

本标准适用于增菌培养物、疑似病料及生猪拭子、猪组织样品中猪源链球菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单不（包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的每方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法

3缩略语

本标准采用下列缩略语：

荧光PCR荧光聚合酶链式反应

Ct值每个反应管内的荧光信号量达到设定的闽值时所经历的循环圈数

DNA脱氧核糖核酸

Taq酶TaqDNA聚合酶

PBS磷酸盐缓冲生理盐水

4原理

采用TagMan方法，在比对猪源链球菌16SrDNA基因序列的基础上，设计针对该基因的特异性引

物和特异性的荧光双标记探针进行配对。探针5端‘标记FAM荧光素为报告荧光基团用（R表示），

3'端标记TAMRA荧光素为淬灭荧光基团用（Q表示），它在近距离内能吸收5端‘荧光基团发出的荧光

信号。PCR反应进人退火阶段时，引物和探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧

光信号被Q基团所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时，Taq酶的5'-3的‘外切核

酸酶功能将探针降解。这样探针上的R基团游离出来，所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接

收。随着PCR反应的循环进行，PCR产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

5猪源链球菌通用荧光PCR检测实验室的标准化设ti与管理

猪源链球菌通用荧光PCR检测实验室的标准化设置与管理见GB/T19438.1-2004中附录Co

6试剂和材料

6.1试荆

除另有说明，所用试剂均为分析纯。

6.1.1无水乙醇：-20℃预冷。

6.1.2