GB/T 18448.2-2008 实验动物 弓形虫检测方法

ICS65．020．30

B44

a雷

中华人民共和国国家标准

1

GB／T

18448．2—200l

代替GB／T

实验动物弓形虫检测方法

animal--Methodfor

examinationof

LaboratoryToxoplasmagondii

2009-03-0

2008-12-03发布1实施

中国国家标准化管理委员会仪1”{：瞀鹊紫瓣警糌瞥星发布

GB／T18448．2—2008

刖置

GB／T

18448{(实验动物》由10项实验动物寄生虫检测方法组成。

本部分为GB／T18448的第2部分《实验动物弓形虫检测方法》。

18448．2

本部分自实施之日起代替GB／T2001。

本部分与GB／T

18448．2—2001相比主要技术差异如下：

内容，保留间接血凝试验(IHA)作为推荐方法之一；

b)将检测方法所需的“材料与试剂”和“检测步骤”分别叙述。

本部分附录A是规范性附录。

本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。

本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会。

本部分主要起草人：潘振业、屈霞琴、陈俏梅、李冠民、王彦平。

本部分所代替标准的历次版本发布情况为：

14926．34

——GB／T1994，GB／T18448．2—2001。

18448．2—2008

GB／T

实验动物弓形虫检测方法

1范围

GB／T18448的本部分规定了实验动物弓形虫的检测方法和试剂等。

本部分适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬及猴等实验动物弓形虫的检测。

2原理

根据免疫学原理，采用弓形虫抗原检测被检动物血清中的弓形虫抗体。

3主要试剂和器材

3．1试剂

3．1．1ELISA抗原

3．1．1．1特异性抗原

d--5

弓形虫(RH株)速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠(KM、ICR、BALB／c等均可)，3d后，以

000

无菌生理盐水灌洗被接种小鼠的腹腔，收集含有虫体的小鼠腹腔液，3r／rain离心10min，取沉淀，

000

r／min离心30rain，取上

PBS洗3次。沉淀物加适量蒸馏水反复冻融5次，或用超声波处理后，10

cm×60

清液。上清液用葡聚糖凝胶G200进行纯化(柱内径×柱高：1．5cm)，流速为0．2mL／min。每

管收集2mL左右。共收集60管以上。分别测定每个收集管中蛋白在280nm下的吸光度值。分离纯

化后，出现2个蛋白峰；将第一峰各管合并，即为弓形虫特异性抗原(也称弓形虫可溶性抗原)。

3．1．1．2正常抗原

d～5d后，以

以无菌生理盐水注射清洁级以上实验小鼠(与制备抗原的小鼠同品种或品系)腹腔，3

000

无菌生理盐水灌洗被注射小鼠腹腔，收集小鼠腹腔液，3r／min离心10min，取沉淀，PBS洗3次。

000

沉淀物加适量蒸馏水反复冻融5次，或用超声波处理后，10r／min离心30min，取上清液，即为正常

抗原。

3．1．2抗原片

d～5

弓形虫RH株速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠(KM、ICR、BALB／c等均可)，3d后处

死，收取虫体，胰酶消化，以一定浓度涂片，充分晾干后冷丙酮固定，--20℃保存。

3．1．3弓形虫抗原致敏绵羊红细胞

将绵羊红细胞与一定浓度的鞣酸液反应，制成鞣化红细胞，然后，用弓形虫可溶性抗原在适宜的条

件下致敏鞣化红细胞，制成弓形虫抗原致敏绵羊红细胞。

3．1．4正常对照绵羊红细胞。

3．1．5阳性对照血清

自然感染弓形虫的相应动物抗体阳性血清，或弓形虫免疫血清。

3．1．6阴性对照血清

确证无弓形虫感染的动物血清。

3．1．7酶结合物

辣根过氧化物酶标记的抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬和猴IgG抗体；或辣根过氧化物酶标记葡

萄球菌蛋白A(SPA)。

3．1．8荧光素结合物

异硫氰氢酸荧光素标记的抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬和猴IgG抗体。

1

18448．2—2008

GB／T

3．1．9包被液(o．059．6)

mol／L，pH

1．59

碳酸钠g

碳酸氢钠2．93

g

蒸馏水加至1000mL

PBS(0．017．4)

3．1．10mol／L，pH

氯化钠8g

氯化钾0．2g

2