DB45/T 1951-2019 水牛胚胎冷冻保存技术操作规程

ICS65.020.30

B4343B

DB45

广西壮族自治区地方标准

DBDB1951—201945/T

水牛胚胎冷冻保存技术操作规程水牛胚胎冷冻保存技术操作规程

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2019-05-31发布2019-06-30实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

DB45/T1951DB45/T—2019

目目次

前言................................................................................II................................................................................前言

11..............................................................................范围

21....................................................................规范性引用文件

31........................................................................术语和定义

42......................................................试剂、耗材、设备和实验室要求

52..............................................................冷冻胚胎的选择和标记

63....................................................................冷冻载体的准备

73........................................................................胚胎的冷冻

84........................................................................贮存与运输

94........................................................................胚胎的解冻

附录A（规范性附录）6................................................试剂、耗材和设备

附录B（规范性附录）8..............................................胚胎冷冻和解冻液体

附录C（规范性附录）9............................................胚胎冷冻和解冻记录表

I

DB45/T1951DB45/T—2019

前前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。1.1—2009给出的规则起草。本标准按照GB/T

本标准由广西壮族自治区农业农村厅提出。

本标准由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：广西壮族自治区水牛研究所。

本标准主要起草人：杨春艳、尚江华、郑海英、黄加祥、覃广胜、黄芬香、于农淇、梁贤威。

II

DB45/T1951DB45/T—2019

水牛胚胎冷冻保存技术操作规程水牛胚胎冷冻保存技术操作规程

11范围

本标准规定了水牛胚胎超低温冷冻技术规程，包括程序化冷冻和玻璃化冷冻技术要求。

本标准适用于体内胚胎和通过体外受精、单精子胞质内显微受精、体细胞核移植技术生产的胚胎。本标准适用于体内胚胎和通过体外受精、单精子胞质内显微受精、体细胞核移植技术生产的胚胎。

22规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器5458GB/T

GB/T25881牛胚胎牛胚胎25881GB/T

33术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。下列术语和定义适用于本文件。

3.13.1

超低温保存cryopreservationcryopreservation超低温保存

将经冷冻保护剂处理的胚胎放置在－196℃（液氮）的超低温度中，使其新陈代谢暂时停止，从而

进行长期保存。进行长期保存。

3.23.2

体内胚胎invivoembryosembryosvivoin体内胚胎

通过激素促进母畜超数排卵，再采用自然交配或人工授精，从母畜的输卵管或子宫角内回收发育到

一定时期的早期胚胎。一定时期的早期胚胎。

3.33.3

水牛胚胎体外生产技术invitroproduction,IVPproduction,IVPvitroin水牛胚胎体外生产技术

模拟水牛体内环境，在体外人工控制条件下，通过采集水牛卵巢上未成熟的卵母细胞经体外成熟培

技术生产胚胎。养、精子体外获能、精卵体外受精和受精卵胚胎体外培养等技术生产胚胎。

3.43.4

体外受精invitrofertilization,IVFfertilization,IVFvitroin体外受精

成受精过程的技术。模拟体内环境使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。

1

DB45/T1951DB45/T—2019

3.53.5

胞浆内单精子注射技术intracytoplasmicsperminjection,ICSIinjection,ICSIspermintracytoplasmic胞浆内单精子注射技术

借助显微操作系统将单一精子注射入卵子内使其受精的技术。

3.63.6

体细胞核移植somaticcellnucleartransfer,SCNTtransfer,SCNTnuclearcellsomatic体细胞核移植

将一个动物的体细胞核移入去核的成熟卵母细胞中，产生与供体动物遗传成份基本一致的动物后代

技术。

44试剂、耗材、设备和实验室要求

4.14.1试剂

所用试剂、药品以及要求见附录A.1。

4.24.2耗材

所用耗材见附录A.2。

4.34.3设备

所用主要设备见附录A.3。

4.44.4实验室要求

工作区应设置准备室、缓冲间、无菌间、细胞保存室等。其中，缓冲间面积不得小于3m2，应安置

更衣柜和