GB/T 22971-2008 牛奶和奶粉中安乃近代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22971—2008

牛奶和奶粉中安乃近代谢物

残留量的测定液相色谱■串联质谱法

Determinationofmetaboliteresiduesofdipyrone

inmilkandmilkpowder—LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

发布

GB/T22971—2008

刖

本标准附录A、附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准负责起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验

检疫局。

本标准主要起草人：沈金灿、谢丽琪、肖陈贵、朱玉兰、熊贝贝、林燕奎、庞国芳。

T

GB/T22971—2008

牛奶和奶粉中安乃近代谢物

残留量的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了牛奶和奶粉中安乃近代谢物4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine)、4-乙酰

氨基安替比林(4-acetylaminoantipyrine)、4-甲基氨基安替比林(4-melhylaminoantipyrine)和4-氨基安

替比林(4-aminoantipyrine)的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和

4-氨基安替比林残留量的测定。

本标准的方法检出限为：对于牛奶，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林

和4-乙酰氨基安替比林均为5.0Mg/kg；对于奶粉，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基

安替比林和4-乙酰氨基安替比林均为40.0Mg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD)

3原理

牛奶和奶粉中安乃近代谢物残留加入Tris溶液后用乙睛提取，提取液经正己烷脱脂净化，液相色

谱-串联质谱仪测定。4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林采用外标法定量，

4-甲基氨基安替比林采用内标法进行定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2异丙醇。

4.3乙睛：色谱纯。

4.4三轻甲基氨基甲烷(Tris)。

4.5乙酸钱：色谱纯。

4.61.0mol/LTris溶液：准确称取12.1g三轻甲基氨基甲烷，用水定容至100mLo

4.7样品定容溶液：甲醇-水(1+19)。

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GB/T22971—2008

4.85mmol/L乙酸钱溶液：准确称取0.385g乙酸钱，用950mL水溶解，用乙酸将溶液调至pH3.0,

再加水定容至1000mL0

4.94-甲基氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine,C12Hl5N3O,CAS：519-98-2).4-乙酰氨基安替比

林(4-acetylaminoantipyrine,C13H1SN3O2,CAS：83-15-8)、4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoanti-

pyrine,Ci2H13N3O2»CAS：1672-58-8)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine,CuH】3N3O,CAS：83-07-8)标

准物质：纯度$99%。

4.10内标标准物质：4-异丙基氨基安替比林(4-isopropylantipyrine,C14H,9N30)，纯度$99%。

4.11100mg/L标准储备溶液：准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质(4.9),用甲醇(4.1)配制

成浓度为100mg/L的标准储备溶液，避光一18C保存。

4.121.0mg/L混合标准储备溶液：吸取每种适量标准储备溶液(4.11),用甲醇稀释成1.0mg/L的

混合标准工作溶液，避光一18C保存。

4.13100mg/L内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质(4.10)用甲醇(4.1)配制成浓度为

100mg/L标准储备溶液，避光一18C保存。

4.141.0mg/L内标工作溶液：吸取适量的内标储备溶液(4.13),用甲醇稀释成1.0mg/mL的内标标

准工作溶液，避光一18C保存。

4.15基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准储备溶液(4.12)和适量内标工作溶液(4.14),用空

白样品提取液配成浓度为1.0卩g/L、5.0卩g/L、10.0yg/L、20.0Mg/L.4O.0Mg/L,100Mg/L和内标浓

度为10.0Mg/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。

4.16滤膜：0.2“m。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2旋转蒸发仪。

5.3旋涡混匀器。

5.4分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.5移液器：10“L〜100mL和100mL~1000卩L。

5.6带刻度聚丙烯离心管：15mL和50mL,具塞。

5.7低温离心机:转速大于5000r/min,可制冷到4°C0

5.8容量瓶：25mL0

5.9鸡心瓶。

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

取不少于500g有代表性的牛奶或奶粉•充分混匀，分为两份，置于样品瓶中，密封，并作上标记。

6.2试样保存

牛奶置于4C冰柜中避光保存，奶粉则在室温下置于干燥器保存。

7测定步骤

7.1提取

7.1.1牛奶

称取5g试样，精确至0.01g,置于50mL带刻度的聚丙烯离心管(5.6)中，加入100ML内标工作

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GB/T22971—2008

溶液（4.14）和0.5mL1.0mol/L的Tris溶液（4.6）,再加入10mL乙月青，旋涡混合1min,振荡提取

15min,4"C下5000r/min离心5min,提取液转移至25mL容量瓶（5.8）中。再加入8mL乙月青，重复

上述操作，合并提取液，用乙睛定容至25mL,混匀。

7.1.2奶粉

取12.5g奶粉，精确至0.01g,置于100mL烧杯中，加适量35C〜50°C水将其溶解，待冷却至室

温后，加水至总重量为100g,充分混匀后准确称取5g（精确到0.01g）样品于50mL聚丙烯离心管中，

按7.1.1步骤进行处理。

7.2净化

取5.0mL提取液至干净的15mL离心管中，加入3.0mL乙月青饱和过的正己烷，旋涡振荡3min,

4"C下5000r/min离心5min,弃去正己烷层。

将乙月青层转移至鸡心瓶（5.9）中，再加入5.0mL异丙醇，在40C下旋转蒸发至近干。残渣加入

1.0mL样品定容溶液（4.7）溶解，混匀后过滤膜（4.16）,供液相色谱-串联质谱测定。

7.3空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g（精确至0.01g）,按7.1和7.2步骤操作。

7.4测定条件

7.4.1液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a）