GB/T 22992-2008 牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04SB

中华人民共和国国家标准

GB/T22992—2008

牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、

己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚

残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Determinationofzearalanol,zearalanone,diethylstilbestrol,hexestroland

dienoestrolmulti-residuesinmilkandmilkpowder—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

GB/T22992—2008

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人:许泓、吴延晖、何佳、张骏、张曼、林安清、庞国芳。

T

GB/T22992—2008

牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、

己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚

残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了牛奶和奶粉中玉米赤霉醇(zearalanol)、玉米赤霉酮(zearalanone)、己烯雌酚(dieth­

ylstilbestrol)、己烷雌酚(hexesirol)、双烯雌酚(dicno-estrol)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准用于牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定。

本标准方法检出限：牛奶中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚为1.0(ug/L；

奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚为&0“g/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD)

3原理

用乙睛作为蛋白沉淀剂和提取剂进行提取，阴离子固相萃取柱进行净化，用液相色谱-串联质谱仪

测定，内标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1水：GB/T6682,—级。

4.2甲醇：色谱纯。

4.3乙睛：色谱纯。

4.4氨水。

4.5甲酸。

4.6氢氧化钠。

4.75mol/L氢氧化钠溶液:称取200g氢氧化钠，用蒸憎水定容到1L。

4.8淋洗液：氨水-水(1+19)。

4.9洗脱液：甲酸-甲醇(1+19)。

4.10激素及代谢物标准物质：玉米赤霉醇(包括a-玉米赤霉醇和玉米赤霉醇，各50%)纯度大于等

于97%；玉米赤霉酮，纯度大于等于97%；己烯雌酚，纯度大于等于99%；己烷雌酚，纯度大于等于

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GB/T22992—2008

98%；双烯雌酚，纯度大于等于98%。

4.11标准溶液:分别准确称取适量的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、双烯雌酚和己烷雌酚标准物

质,用甲醇（4.2）配制成1mg/mL标准贮备溶液。再根据需要以甲醇配制成不同浓度的混合标准溶液

作为标准工作溶液,保存于4C冰箱中。

4.12内标标准物质：旷玉米赤霉烯醇-4笊代，纯度大于等于99%；己烯雌酚-8気代，纯度大于等

于98%。

4.13内标标准溶液:准确称取适量玉米赤霉烯醇-4氛代和己烯雌酚-8氛代标准物质，用甲醇（4.2）分

别配制成1mg/mL标准贮备溶液。再以甲醇稀释成适用浓度的混合内标工作溶液，保存于4C冰

箱中。

4.14基质提取液：空白样品，除不加入标准工作溶液（4.11）和内标工作溶液（4.13）外，其他操作同

7.1.1及7.1.2处理后得到的溶液。

4.15基质标准工作溶液：将标准工作溶液（4.11）及内标工作溶液（4.13）混合后在氮吹仪中吹干，以基

质提取液（4.14）溶解，涡旋30s后即为基质标准工作溶液。

4.16OasisMAX阴离子固相萃取柱"或相当者：60mg,3mLo

4.17滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾电离源。

5.2自动固相萃取仪或固相萃取装置。

5.3氮气吹干仪。

5.4涡旋振荡器。

5.5离心机：转速大于3500r/mino

5.6高速离心机；转速大于9000r/min,温度可控制在4C。

6试样的制备

6.1牛奶

取50mL新鲜或解冻的牛奶混合均匀，3500r/min离心5min,取下层。

6.2奶粉

取12.5g奶粉于烧杯中，加适量35C〜50C水将其慢慢溶解，转移至100mL容量瓶中，待冷却

至室温，用水定容混匀。取50mL,以3500r/min离心5min,取下层。

7测定步骤

7.1混合基质标准校准溶液的制备

7.1.1样品量取

于50mL离心管中，分别加入不同量混合标准工作溶液（4.11）,使各被测组分玉米赤霉醇、玉米赤

霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚的浓度为2.5ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、

50ng/mL。再分别加入适量内标标准工作溶液（4.13）,使其浓度均为10ng/mL,在氮吹仪上于40C水

浴中吹干。取5个阴性样品，每个样品为5mL,置于上述离心管中涡旋混合后，加10mL乙睛，涡旋混

合3min,3500r/min离心10min,取上清液于离心管中，再向样品中加入5mL乙睛，同前操作，合并

提取液，50C下氮吹至体积小于0.1mLo加水10mL,用5mol/LNaOH调节pH至11.0,4C,

1）OasisMAX阴离子固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并

不是表示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可便用这些等效产品。

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GB/T22992—2008

9000r/min离心5min,备用。

7.1.2提取净化

固相萃取净化条件：先用2niL甲醇、2mL水将柱子活化，流速均为4mL/minc将7.1.1样品上

清液上柱，流速为1mL/min,依次用1mL淋洗液（4.8）.0.5mL甲醇以3mL/min的速度淋洗，通入

20mL空气以4mL/min的速度吹过OasisMAX柱。用4mL洗脱液（4.9）洗脱，流速为1mL/min,