GB/T 38484-2020 植物激素类次生代谢产物的生物活性测定 细胞学评价法

ICS07.080

A21GB

中华人民共和国国家标准

GB/T38484-2020

植物激素类次生代谢产物的生物活性测定

细胞学评价法

Determinationofthebiologicalactivityforplanthormone-relatedsecondary

metabolites-Cytologicalmethod

2020-11-19发布2020-11-19实施

国家市场监督管理总局申＃

国家标准化管理委员会保叩

GB/T38484-2020

前言

本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。

本标准由中国标准化研究院提出并归口。

本标准起草单位s中国计量大学、中国标准化研究院、浙江省检验检疫科学技术研究院。

本标准主要起草人z张雅芬、叶子弘、马爱进、俞晓平、黄超群、崔海峰、许益鹏、申屠旭荐、李翼、

陈丽、吴娟。

I

GB/T38484-2020

植物激素类次生代谢产物的生物活性测定

细胞学评价法

1范围

本标准规定了用细胞学评价法测定植物激素类次生代谢产物生物活性的方法。

本标准适用于植物激素类次生代谢产物生长素、细胞分裂素和赤霉素的活性测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日婉的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单〉适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义、缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件．

3.1.1

植物激素类次生代甜产物planthormone-relatedsecondaηmetabolites

来自植物自身合成的以及通过微生物发酵或化学合成获得的具有调控植物生长、发育与休眠的活

性物质。

3.1.2

生物活性biologyactivity

单位浓度的植物激素类次生代谢产物与其相对应的标准物促进或抑制植物生长、发育与休眠能力

的相对值。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

4-MU,4－甲基伞形酣（4-methylumbelliferon)

←MUG,4－甲基伞形酬－{3-D－葡萄糖隆酸背（4-methylumbelliferyl-{3-D-glucuronide)

AuxRE::GUS：生长素响应gus报告基因（auxin-responsivegusreportergene)

CTKRE::GUS，细胞分裂素响应gus报告基因（cytokinin-responsivegusreportergene)

DPBS:Dulbeeco's磷酸缓冲盐溶液（Dulbecco'sPhosphate-BufferedSaline)

GA，，赤霉酸（gibberellicacid)

GARE::GUS，赤霉素响应gus报告基因（gibberellin-responsivegusreportergene)

GUS:/3-葡萄糖醒酸背酶（/3-glucuronidase)

NAA，茶乙酸。－naphthylaceticacid]

ZT：玉米素（zeatin)

1

GB/T38484-2020

4原理

植物激素类活性物质通过与相应的激素受体结合可调节相关蛋白与其靶基因启动子中的激素应答

元件结合进而诱导或抑制靶基因表达．选用携带激素响应的gus报告基因的转基因拟南芥原生质体

细胞为试验材料，以标准物为参照，根据GUS酶活和标准物浓度对数的线性回归关系得到标准曲线，

计算在线性范围内诱导产生的GUS酶活相同的标准物浓度与试样浓度的比值，表示单位浓度

(mg/mL）试样所具有的植物激素类次生代谢产物的生物活性。其中GUS蛋白可水解4MUG为

4MU，由此以37℃水浴条件F每徽克GUS蛋白每分钟水解4MUG产生的4MU的物质的量来指示

GUS酶活。

5试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1水。GB/T6682一级。

5.2AuxRE::GUS细胞系。拟南芥（Arabidopsisthaliana)Columbia(Col-0）生态型，含有生长素应

答元件AuxREs，携带单拷贝gus基因，活细胞数二三1×106个／mL.

5.3GARE::GUS细胞系。拟南芥（Arabidopsisthaliana)Columbia(Col-0）生态型，含有赤霉素应

续元件TATC-boxs，携带单拷贝gus基因，活细胞数》1×106个／mL。

5.4CTKRE::GUS细胞系，拟南芥（Arabidopsisthaliana)Columbi国CCol-0）生态型，含有细胞分裂

素应答元件ARRlAT，携带单拷贝gus基因，活细胞数》1×106个／mL.

5.5细胞系培养液。不含:i'f.糖和琼脂的MS培养基4.74g，加950mL水溶解后，加入30.00g藤糖，

0.75g氯化钙，0.35g硝酸饵，充分混匀后用氢氧化销调整pH至5.60，加水定容至1000mL,0.22µm

滤膜过滤除菌。现配现用．

5.6DPBS,pH7.4.称取氯化销8.00g，氯化饵0.20g，十二水合磷酸氢工销2.90g，磷酸二氢梆0.24g，加

水定容至1000mL，混匀后常温保存备用．可使用同类商品化产品。

5.7拍提液。称取二水合乙二胶四乙酸二锅3.72g，加入700µLF←琉基乙晖，1mL聚乙二回事辛基苯基

酶，用DPBS溶解并定容至1000mL，混匀后常温保存备用。

5.8含1mmol/L4MUG的抽提液。称量105.6mg4MUG，用拍提液溶解并定容至300mL，现配

现用。

5.90.2mg/mL牛血清蛋白溶液．称量20.0mg牛血清蛋自标准品，用DPBS溶解并定容至100mL,

现配现用。

5.10反应终止液。称取21.20gNa,CO，，用水溶解并定容至1000mL.

5.11考马斯亮蓝染色液。称取0.5g考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90%的乙薛中，并