JJF 1527-2015 聚合酶链反应分析仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范

JJF1527—2015

聚合酶链反应分析仪校准规范

CalibrationSpecificationforPolymeraseChainReactionAnalyzers

2015-06-15发布2015-09-15实施

国家质量监督检验检疫总局发布

JJF1527—2015

聚合酶链反应分析仪校准规范

CalibrationSecificationJJF1527—2015

p

forPolymeraseChainReactionAnalyzers

归口单位全国生物计量技术委员会

:

主要起草单位中国计量科学研究院

:

参加起草单位上海市计量测试技术研究院

:

广东省计量科学研究院

天津市计量监督检测科学研究院

本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释

JJF1527—2015

本规范主要起草人

:

高运华中国计量科学研究院

()

参加起草人

:

张丽萍上海市计量测试技术研究院

()

尹强广东省计量科学研究院

()

田昀天津市计量监督检测科学研究院

()

保志娟广东省计量科学研究院

()

吴建英上海市计量测试技术研究院

()

JJF1527—2015

目录

引言

………………………(Ⅱ)

范围

1……………………(1)

引用文件

2………………(1)

术语

3……………………(1)

聚合酶链反应

3.1………………………(1)

聚合酶链反应分析仪

3.2………………(1)

概述

4……………………(1)

计量特性

5………………(1)

校准条件

6………………(2)

校准设备及标准物质

6.1………………(2)

校准项目和校准方法

7…………………(2)

校准条件

7.1……………(2)

温度示值误差温度均匀性校准

7.2、…………………(2)

升降温速率校准

7.3……………………(4)

定量仪样本示值误差样本线性的校准

7.4PCR、…………………(5)

校准结果表达

8…………(6)

复校时间间隔

9…………(6)

附录标准物质的准备及配制

A………(7)

附录反应体系的配制

BPCR…………(9)

附录温度示值误差校准结果的不确定度评定模型

C………………(10)

附录样本示值误差结果的不确定度评定模型

D……(12)

附录校准原始记录参考格式

E………(14)

附录校准证书内页参考格式

F()…………………(15)

Ⅰ

JJF1527—2015

引言

本规范的编制基于聚合酶链反应分析仪主要技术参数实验测试参考了

,JJF1030—

恒温槽校准规范食源性病原体

2010《》、SN/T2102.1—2008/ISO22174:2005《PCR

检测技术规范第部分通用要求及定义

1:》、SN/T2102.2—2008/ISO20836:2005

食源性病原体检测技术规范第部分性能试验要求

《PCR2:PCR》、YY/T1173—

聚合酶链反应分析仪等文件

2010《》。

本规范为首次发布

。

Ⅱ

JJF1527—2015

聚合酶链反应分析仪校准规范

1范围

本规范适用于模块加热的聚合酶链反应分析仪计量性能的校准对于其他

(PCR),

类型的仪可参照本规范执行

PCR,。

2引用文件

本规范引用了下列文件

:

分析实验室用水国家标准

GB/T6682—2008

聚合酶链反应分析仪

YY/T1173—2010

凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本规范凡是不注日期的引用文

,;

件其最新版本包括所有的修改单适用于本规范

,()。

3术语

聚合酶链反应

3.1polymerasechainreaction,PCR[YY/T1173—20103.1]

一种对特定的或片段在体外进行快速扩增的方法由变性退火延

DNARNA,——

伸三个基本反应步骤构成

。

聚合酶链反应分析仪

3.2polymerasechainreactionanalyzer[YY/T1173—20103.2]

基于聚合酶链反应技术原理模拟或的复制过程在模板

PCR(),DNARNA,、

引物聚合酶等存在的条件下特异扩增已知序列对其进行检测分析的仪器设备

、,,。

4概述

聚合酶链反应分析仪是基于技术原理模拟或的复制过程在模

PCR,DNARNA,

板引物聚合酶等存在的条件下特异扩增已知序列对其进行检测分析的仪器设

、、,,

备包括定性仪和定量仪两类定性通常由样品载台热循环部件

,PCRPCR。PCR、、

控制部件和电源部件等部分组成定量仪主要由样品载台热循环部件控制部

。PCR、、

件光学检测部件电源部件计算机及应用软件等部分组成

、、、。

5计量特性

计量特性见表

1。

表1聚合酶链反应分析仪计量特性

项目定性仪定量仪

PCRPCR

温度示值误差

++

温度均匀度

++

平均升温速率

++

1

JJF1527—2015

表1续

()

项目定性仪定量仪

PCRPCR

平均降温速率

++

样本示值误差

-+

样本线性

-+

注:为校准项目;为非校准项目。

+-

6校准条件

仪器使用允许的环境条件测量过程中应测量和记录环境的温度相对湿度

,、。

校准设备及标准物质

6.1

温度校准装置

6.1.1

由若干个通常为个精密温度传感器数据采集分析模块组成测温范围

(15)、,

温度校准装置测量不确定度且需要通过计量检定

(0~120)℃,≤0.1℃,。

标准物质

6.1.2

校准时应采用国内外有证标准物质包括质粒标准物质核糖核酸标准物

,:DNA、

质其特性量值拷贝数9相对扩展不确定度

,(≥10copies/μL,≤5%)。

电子天平

6.1.3

精度且需要通过计量检定

≤0.01mg,。

移液器

6.1.4

规格且需要通过计量检定

:2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL,。

校准前按照附录配制校准时使用的溶液

A。

7校准项目和校准方法

校准条件

7.1

校准前需将仪开机预热

PCR30min。

温度示值误差温度均匀性校准

7.2、

将仪及温度校准装置各部件连接完好在温度传感器表面上涂抹适量的导

7.2.1PCR,

热油按图所示将温度传感器置于仪孔加热模块设定孔中其他型号的

,1PCR(96),

仪可参照图进行测试

PCR1。

2

JJF1527—2015

图温度传感器布点示意图

1

参照送校单位提供的仪说明书设定温度控制程序如表所示不能设定

7.2.2PCR,2,

为温控程序起点的仪温控程序参照表进行设定

30℃PCR,2。

表2PCR仪温度控制程序标准程序表

步骤设定温度点设定温度持续时间

130℃1min

295℃3min

330℃2min

490℃3min

550℃3min

670℃3min

760℃3min

830℃1min

启动温度校准装置记录整个数据采集过程并保存

7.2.3