DB44/T 2206-2019 冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒鉴定技术规程

ICS65.020.20

B31

DB44

广东省地方标准

DB44/T2206—2019

冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒

鉴定技术规程

Theregulationforresistanceevaluationofwaxgourdtozucchini

yellowmosaicvirus

2019-10-31发布2020-01-31实施

广东省市场监督管理局发布

DB44/T2206—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准附录A为规范性附录，附录B、C、D为资料性附录。

本标准由广东省农业农村厅提出并归口。

本标准主要起草单位：广东省农业科学院植物保护研究所、湖南省植物保护研究所。

本标准主要起草人：何自福、汤亚飞、佘小漫、刘勇、蓝国兵、邓铭光、于琳、李正刚。

I

DB44/T2206—2019

冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒鉴定技术规程

1范围

本标准规定了冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒（Zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV）鉴定技术的

术语和定义、毒原准备、人工接种抗性鉴定、病情调查、抗病性评价及鉴定报告的撰写。

本标准适用于冬瓜品种及材料对小西葫芦黄花叶病毒的人工接种抗性鉴定。

2术语与定义

下列术语和定义适合于本标准。

2.1

小西葫芦黄花叶病毒Zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV

小西葫芦黄花叶病毒为马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus）成员，具有马

铃薯Y病毒属成员基因组结构的典型特征，主要依靠蚜虫以非持久方式传播，也可以通过病株汁液和机

械接触等方式传播，但不能通过种子传播，主要侵染冬瓜、黄瓜、西葫芦、甜瓜、西瓜等葫芦科作物。

ZYMV侵染的植物出现花叶、斑驳、褪绿黄化、叶面凸凹不平、卷曲畸形、新叶变小、果实畸形、果面颜

色不均匀或产生褐斑等症状，或植株出现矮化，新梢坏疽，甚至凋萎死亡。

2.2

毒原virussource

毒原ZYMV-DG：采自广东冬瓜主产区的典型病样，经检测、纯化、鉴定、扩繁后，保存的用于后续

实验的样品。

2.3

人工机械摩擦接种artificialmechanicalinoculation

通过人工操作，在供试植物叶面上造成微小伤口，使病毒从伤口进入细胞内而引起发病的过程。

2.4

抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance

采用合适的技术方法，鉴定作物对特定病害的抗性水平。

3毒原ZYMV-DG准备

从广东冬瓜主产区采集表现花叶、斑驳、泡状突起等症状的病叶，经RT-PCR确定病样中存在ZYMV，

然后通过摩擦接种到能产生枯斑的健康苋色藜植株叶片上，经2至3次单斑分离，将分离后的病源接种到

健康的冬瓜植株上繁殖，待接种植株显症后进行分子检测，测序确定无误后，采集病叶，放置-80℃保

存备用。具体见附录A。

1

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4仪器设备

电子天平，研钵，超低温冰箱，量筒，普通冰箱，PCR仪，电泳仪，凝胶成像系统，移液器，离心

机，恒温水浴锅。

5人工接种抗性鉴定

5.1接种室

室内抗性鉴定应在具备良好发病环境的60目防虫日光温室中进行。

5.2育苗

将冬瓜种子用温水浸种2h～4h，放置在28℃恒温培养箱催芽至露白，直播于8cm×12cm黑色塑

料育苗杯中，每杯2粒。播种用基质土为经121℃湿热灭菌消毒30min的新鲜育苗基质土。育苗在60目防

虫日光温室内进行，室内温度应控制在25℃～30℃，确保幼苗为生长健壮、长势一致的无病苗。

5.3鉴定品种设置

鉴定品种随机排列设置，4次重复，每个处理30株。

5.4接种

5.4.1接种时间

挑选健康无病的冬瓜苗，在子叶期进行接种。

5.4.2接种病原制备

1g新鲜或-80℃保存的病原病毒感染的发病叶组织加10mL磷酸缓冲液（0.01mol/L，pH7.2，见

附录D），在灭菌的研钵中匀浆，再经灭菌的纱布过滤，其滤液为接种悬浮液。

5.4.3接种方法

在叶面上撒少量400目～600目金刚砂，然后用棉签蘸取接种悬浮液在叶片上沿叶脉方向轻轻摩擦，

再用清水将叶面多余的悬浮液和金刚砂轻轻洗去。

5.4.4接种后的管理

供试幼苗置于接种室内继续培养，保持接种室温度为25℃～30℃，自然光照，常规水肥栽培管理。

6病情调查

6.1调查时间

接种后7d～35d进行，每隔7d调查一次。

6.2病情分级标准

冬瓜苗期病情级别及其相对应的症状描述见表1。

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表1小西葫芦黄花叶病毒引起的冬瓜病毒病病情分级标准

病情级别症状描述

0级全株无症状

1级心叶脉明或轻花叶

3级心叶及中部叶片花叶

5级心叶及中部叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩，植株轻度矮化

7级重花叶、多数叶片畸形、皱缩，植物矮化

9级重花叶、叶片明显畸