GB/T 18648-2002 非洲猪瘟诊断技术

GB/T18648-2002

前言

非洲猪瘟(Africanswinefever，简称ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、

高度接触传染性疾病其特征为病程短，病死率高，临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟，表现高热、

皮肤充血、流产、水肿及脏器出血。为世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英)，

OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE]和我国规定的动物一类疾病。病毒在鲜肉和腌肉中能存活数

月。

ASF的实验室诊断分为两类:第一类包括病毒分离、病毒抗原和基因组DNA的检测;第二类包括

抗体的检测。试验方法的选择主要依据本国或本地区的疾病情况而定。在没有ASF但又怀疑该病存在

的国家，实验室诊断必须应用无感染性的诊断方法，即应用聚合酶链反应(PCR)检测病毒基因组DNA

和应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体

我国是无ASF国家，目前尚无ASF的检疫方法。农业部动物检疫所于199?年与美国梅岛动物病

研究中心进行了ASF的无感染性快速检测方法的合作研究，建立了适合于我国使用的由可疑感染动物

血液和内脏器官中直接检测ASFVDNA的PCR技术，以及检测血清中ASFV抗体的ELISA方法。本

标准对这两种方法技术要求作了规定

本标准的附录A、附录B和附录C都是标准的附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位:农业部动物检疫所。

本标准主要起草人:蒋正军、王树双、尹燕博、蔡丽娟、郭福生、陆明哲、孙淑芳、龚振华。

中华人民共和国国家标准

GB/'r18648-2002

非洲猪瘟诊断技术

DiagnostictechniquesforAfricanswinefever

范围

本标准规定了非洲猪瘟(ASF)聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)的技术要求。

本标准适用于生猪和野猪等易感动物及其产品ASF的诊断和检疫。

2PCR试验

2.1材料准备

2.1.1样品DNA制备方法见附录A(标准的附录)。

2.1.2电泳液缓冲液的配制方法见附录B(标准的附录)。

2.1.3标准ASFV-BA株DNA、引物1、引物2,1.25mmol/LdN丁P和载样缓冲液。

2.1.4台克(Taq)DNA聚合酶、分子量为100碱基对(bp)Ladder(标准DNAMarker)0和10倍浓度

的聚合酶链反应(PCR)扩增缓冲液。

2.1.5自动DNA热循环仪。

2.2操作方法

2.2.1将下列试剂按要求量加人到0.75mL的离心管中:灭菌蒸馏水(24.5风);10倍浓度的PCR扩

增缓冲液(5VL);1.25mmol/LdNTP贮存液(8pL);引物1(1pL);引物2(1pL);样品DNA溶液

(10JAI)(见附录A);TaqDNA聚合酶(。.5