GB/T 27621-2024 马鼻肺炎诊断技术

ICS11220

CCSB.41

中华人民共和国国家标准

GB/T27621—2024

代替GB/T27621—2011

马鼻肺炎诊断技术

Diagnostictechniquesforequinerhinopneumonitis

2024-11-28发布2025-06-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T27621—2024

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

缩略语

4……………………1

临床诊断

5…………………2

样品采集处理与保存

6、……………………2

实时荧光

7PCR……………4

病毒分离鉴定

8……………5

微量血清中和试验

9………………………7

通用抗体间接

10EHV-1/4ELISA………………………9

分型鉴别间接

11EHV-1/4ELISA……………………10

综合判定

12………………12

附录规范性试剂配制方法

A()…………13

附录资料性核酸检测用引物探针序列信息

B()、……………………14

Ⅰ

GB/T27621—2024

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件代替马鼻肺炎病毒检测方法与相比除

GB/T27621—2011《PCR》,GB/T27621—2011,

结构调整和编辑性改动外主要技术变化如下

,:

删除了的检测见年版的第章

———EHVPCR(20117);

增加了临床诊断见第章

———(5);

增加了样品采集处理与保存见第章

———、(6);

增加了实时荧光见第章

———PCR(7);

更改了病毒分离鉴定见第章年版的第章

———(8,20116);

增加了微量血清中和试验见第章

———(9);

增加了通用抗体间接见第章

———EHV-1/4ELISA(10);

增加了分型鉴别间接见第章

———EHV-1/4ELISA(11)。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由中华人民共和国农业农村部提出

。

本文件由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本文件起草单位上海海关动植物与食品检验检疫技术中心青岛海关技术中心新疆农业大学

:、、、

江苏农牧科技职业学院广州海关技术中心

、。

本文件主要起草人王艳朱来华刘建华郑小龙李健胡月武彩红冯之航薛俊欣蔡一村

:、、、、、、、、、、

林颖峥张强王群吴晓薇

、、、。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为

:

年首次发布为

———2011GB/T27621—2011;

本次为第一次修订

———。

Ⅲ

GB/T27621—2024

引言

根据世界动物卫生组织中陆生动物诊断试验和疫苗手册定义马鼻肺炎

(WOAH)《》,(Equinerhi-

是由亲缘关系密切的马甲疱疹病毒型和马甲

nopneumonitis,ER)1(Equidalphaherpesvirus-1,EHV-1)

疱疹病毒型引起的马属动物的几种高度传染性疫病的总称在世

4(Equidalphaherpesvirus-4,EHV-4),

界马群中呈地方性流行感染被列入名录

。EHV-1WOAH。

马甲疱疹病毒型和马甲疱疹病毒型隶属于疱疹病毒科亚科疱疹病毒水痘病毒属病毒呈球

14α。

形或不规则球形直径为内含面体核衣壳

,120nm~200nm,20。

感染马主要症状为上呼吸道感染流产新生驹死亡和神经症状只感染马引起发

EHV-1、、;EHV-4,

热嗜睡厌食下颌淋巴结病变和大量浆液性黏液脓性鼻腔分泌物等呼吸道症状

、、、、。

马鼻肺炎诊断技术包括临床诊断病原学检测和血清学检测方法

、。

本文件的修订参考了陆生动物诊断试验与疫苗手册的有关内容并结合了我国相关技

《》(WOAH),

术研究新成果

。

Ⅳ

GB/T27621—2024

马鼻肺炎诊断技术

1范围

本文件描述了感染和感染的临床诊断样品采集与处理以及实时荧光病毒

EHV-1EHV-4、,PCR、

分离鉴定微量血清中和试验间接的方法

、、ELISA。

本文件适用于感染和感染的诊断监测

EHV-1EHV-4、。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

兽医诊断样品采集保存与运输技术规范

NY/T541、

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义

。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

乳仓鼠肾细胞

BHK-21:(BabyHamsterKidney-21)

细胞病变反应

CPE:(CytopathicEffect)

值循环阈值

Ct:(CycleThreshold)

脱氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

乙二胺四乙酸二钠盐

EDTA·Na2:(EthyleneDiamineTeraaceticAcidDisodiumSalt)

马真皮成纤维细胞系

E-derm:(Equine-dermisCell)

马疱疹病毒型

EHV-1:-1(EquineHerpesvirus-1)

马疱疹病毒型

EHV-4:-4(EquineHerpesvirus-4)

酶联免疫吸附试验

ELISA:(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay)

牛肾细胞

MDBK:(BovineKidneyCell)

最低需要培养基

MEM:(MinimumEssentialMedium)

值光密度值

OD:(OpticalDensity)

磷酸盐缓冲生理盐水

PBS:(PhosphateBufferSaline)

聚合酶链反应

PCR:(PolymeraseChainReaction)

兔肾细胞系

RK-13:(RabbitKidneyCell)

半数组织感染量

TCID50:(MedianTissueCultureInfectiveDose)

缓冲液

TE:TE(Tris-EDTA)

1

GB/T27621—2024

5临床诊断

51流行病学

.

511马属动物是和的自然宿主各种年龄的马均可感染常发生于青年马匹岁以

..EHV-1EHV-4。,,2

下幼驹发病最多

。

512病马和恢复后的带毒马是本病的主要传染源病毒存在于病马的鼻液血液和粪便以及流产

..。、,

马的胎膜胎液和胎儿组织内

、。

513存在于病马流产时的排出物中通过直接接触包括交配和间接接触传播可经子宫感

..EHV-1,(),

染胎儿存在于病马的鼻腔分泌物中常经呼吸道和消化道传播

;EHV-4,。

52临床症状

.

521和可引起呼吸系统原发性感染导致呼吸道疾病主要表现为发热食欲不振

..EHV-1EHV-4,,、、

沉郁流涕和呼吸困难

、。

522可引起流产也有个别报道可从流产胎儿分离得到怀孕母马感染后突然发生

..EHV-1,EHV-4。

不明原因的流产同时伴有发热沉郁等症状流产胎儿一般为死胎产出为活胎的多在数日后死亡

,、,,。

523感染还能引起神经症状早期表现为突然共济失调轻度瘫痪尾部僵硬尿失禁等大

..EHV-1。、、、,

多伴有发热流产呼吸系统症状

、、。

53病理变化

.

531在气管胃和小肠中有胶冻样黏膜皱壁小肠的孤立淋巴滤泡和集合淋巴结肿大有些地方出现

..、,,

浅表性烂斑或较深的溃疡

。

532早期流产的胎儿发生严重的自溶后期流产的胎儿体表外观新鲜皮下常有不同程度的水肿和

..。,

出血可视黏膜黄染心肌出血肺水肿和胸腹水增量脾脏肿大肝包膜下散在针尖大到粟粒大灰黄

,。,、,。

色坏死灶

。

533表现血管炎出血血栓缺血性神经元损伤等症状

..、、、。

54结果判定

.

出现上述流行病学特征临床症状和病理变化的病例可初步判定为疑似感染或

、,EHV-1EHV-4

感染应进一步进行实验室检测确诊

,。

6样品采集处理与保存

、

61仪器设备

.

611组织研磨器

..。

62试剂材料

.

621一次性采血管含有抗凝剂

..()。

622一次性采血管不含有抗凝剂

..()。

623一次性采血针

..。

624一次性采样拭子鼻咽拭子

..()。

625培养基

..MEM。

2

GB/T27621—2024

626按照附录中配制

..PBS,AA.1。

627采样管

..10mL。

628离心管

..1.5mL。

629注射器

..10mL。

6210微孔滤膜器

..(0.45μm)。

6211抗生素储存液溶液按照配制

..,A.2。

6212组织研磨器

..。

6213淋巴细胞分离液商品化试剂

..()。

63样品采集

.

631样品的采集

..

按的要求执行

NY/T541。

632鼻咽拭子

..

以无菌鼻咽采样拭子探入动物鼻咽进行采样最好在呼吸道症状急性期采集放入预冷

(),3mL

或于灭菌的采样管中

PBSMEM10mL。

633组织样品

..

无菌采集流产病例的胎盘或胎儿的肝肺胸腺脾等有神经症状死亡的动物采集脑或脊髓等组

、、、。

织样品或脑脊髓液

。

634抗凝全血

..

用一次性采血针采集血液放入一次性采血管含有抗凝剂抗凝剂可以使用柠檬

10mL~20mL();

酸盐肝素或是检测的首选抗凝剂

、EDTA,EDTAPCR。

635