GB/T 22953-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22953—2008

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、

多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量

的测定液相色谱■串联质谱法

Determinationofivermectin,abamectin,doramectinandeprinomectin

residuesinfugu,eelandbakedeel—LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

GB/T22953—2008

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人:林峰、吴映璇、姚仰勋、欧阳少伦、林海丹、庞国芳。

T

GB/T22953—2008

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、

多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量

的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中阿维菌素类药物伊维菌素(ivermectin).阿维菌素(abamec-

lin)、多拉菌素(doramectin)和乙酰氨基阿维菌素(eprinomectin)残留量的液相色谱-串联质谱测定

方法。

本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残

留量的测定。

本标准的方法检出限:河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿

维菌素均为5Mg/kg

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD)

3原理

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙睛提取

后，正己烷脱脂，中性氧化铝柱净化。样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。

4试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1乙睛：色谱纯。

4.2甲醇。

4.3正己烷，使用前以乙月青饱和。

4.4中性氧化铝：活度I级。

4.5无水硫酸钠：经650°C灼烧4h,置于干燥器中备用。

4.6中性氧化铝净化柱：取一空的固相萃取柱管，下部填入少量脱脂棉，装入2g中性氧化铝(4.4),±

部再填充4g无水硫酸钠，使用前装填。

4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准物质：纯度$99%。

4.8100Mg/mL标准储备液：准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标

准品(精确至0.1mg),用乙月青分别配制成100Mg/mL的标准贮备液，一18°C储存。

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GB/T22953—2008

4.90.500Mg/mL混合标准工作液：准确吸取0.500mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿

维菌素标准储备液（4.8）至100mL容量瓶中，以乙月青稀释并定容，此混合工作液的浓度为0.500Mg/mL

—20°C储存。

4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准工作液（4.9）,用空白样品提取液配

制成不同浓度的基质混合标准工作溶液,使用前配制。

4.11滤膜：0.2Mm

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾电离源。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g

5.3组织捣碎机。

5.4匀浆机：转速大于或等于8000r/min

5.5离心机:转速大于4000r/min

5.6超声波水浴。

5.7液体混匀器。

5.8固相萃取装置。

5.9氮吹仪。

6试样的制备与保存

取样品约500g用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记.于一18C冰箱中

保存。

制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。

7测定步骤

7.1提取

准确称取2g组织样品（准确至0.01g）至50mL离心管中，加入8mL乙騰（4.1）,匀浆机上

8000r/min均质20s,4000r/min离心5min,上清液转移至50mL离心管中；另取一50mL离心管加

入8mL乙睛，洗涤匀浆刀头10s,洗涤液移人前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器

上振荡30s,4000r/min离心5min,上清液合并至50mL离心管，离心管中的沉淀再加入6mL乙月青，

用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30s,4000r/min离心5min,±清液合并至50mL离

心管中，乙睛定容至25.0mL刻度，混匀备用。

7.2净化

向上述装有样品提取液50mL离心管中加入10mL乙月青饱和的正己烷（4.3）脱脂，涡旋振荡

1min,4000r/min离心5min,弃去上层正己烷，重复此操作一次，下层乙睛溶液待用。

将中性氧化铝净化柱（4.6）安置在固相萃取装置上，准确移取10.0mL已脱脂的样品提取液至中

性氧化铝净化柱中，控制流速在1mL/min〜2mL/min,用2mLX2乙月青淋洗净化柱，收集全部流出

液，流出液转移至吹氮管中，50C下氮气吹至干，用1.00mL乙睛溶解残渣，并置超声波水浴中超声振

荡10min,0.2Mm滤膜（4.11）过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3测定条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：IntersilC8-3柱，5卩m,150mmX4.6mm（内径）或相当者；

b）柱温：40°C；

c）进样量：25ptL；

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GB/T22953—2008

d）流速：O.8mL/min；

e）流动相：甲醇+水，梯度洗脱，见表10

表1梯度洗脱程序

时间/min甲醇/%水/%

0.007525

3.001000

10.001000

10.017525

15.007525

7.3.2质谱参考条件

a）离子源：电喷雾电离源（ESI）；

b）扫描方式：负离子扫描；

c）检测方式：多反应监测（MRM）；

d）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流

量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵

敏度；

e）监测离子对和相应的参考质谱参数，见表2。

表2伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的监测离子对和相应的参考质谱参数

定性离子对定量离子对采集时间/去簇电压/碰撞能量/

化合物名称

（＞n/z）msVV

873.7/567.8-37

伊维菌素873.7/229.210075

873.7/229.2—50

871.7/565.2—40

阿维菌素871.7/565.2100-80

871.7/229.3—54

897.6/591.4-38

多拉菌素897.6/591.2100-70

897.6/229.0—51

912.5/270.0-49

乙酰氨基阿维菌素