T/NXXH 009-2024 精液稀释技术规程

范围:本文件规定了精液稀释技术的稀释保护液配制、稀释方法、稀释比例及降温与平衡。 本文件适用于精液的稀释; 主要技术内容:3术语和定义.本文件没有需要界定的术语和定义。4稀释保护液配制配制要求配制冻精用的稀释保护液，应使用双重蒸馏水、新鲜的卵黄和化学分析纯试剂等，所用器具保证清洁、干燥、无菌。所有稀释溶液(除卵黄外)都必须经过滤后并在水浴中煮沸消毒，冷却至35 ℃～38 ℃ ，再加卵黄和抗菌素，甘油单独水浴蒸煮消毒30 min～45 min 。配制好的稀释液应做好标记，并将三角瓶口盖用硅胶塞封好后放入4.0℃ 的冰箱冷藏。稀释保护剂必须现用现配。配制所有器具应洁净并消毒灭菌。所用化学试剂（化学纯以上）；柠檬酸三钠、果糖、蔗糖、乳糖、甘油，鸡蛋用健康鸡场的新鲜鸡蛋，双蒸水。稀释液按照以下规定操作：a)基础液：柠檬酸钠1.5 g、葡萄糖3.0 g、乳糖5.0 g、加蒸储水至100.0 mL、消毒待用。b)稀释液：取消毒后的基础液75.0 mL,卵黄20.0 mL,甘油5.0 mL。c)所有稀释液每100.0 mL中添加青霉素、链霉素各10万单位，现配现用。5稀释与分装5.1 —次稀释法将需加的稀释液一次性加完。二次稀释法将所加稀释液分为两次添加，首先加入不含甘油的一液，加至稀释总量的一半，降温、平衡后再加足含有甘油的二液。添加与精液等温的稀释液时应缓缓加入，经两次稀释后甘油总量4 mL/100 mL～6 mL/100 mL为宜。细管精液的分装细管为无毒、耐低温的专用塑料管。平衡前在室温下或平衡后在3 ℃～5 ℃环境下均可分装，管内需留一定的空隙。分装后两端封口应严密。微型分装管的精液量小于0.18 mL,中型管小于0.40 mL。稀释比例：根据原精液密度和活力确定稀释倍数，稀释比例以1:1～1:5为宜，确保每一剂量冻精的有效精子数能达到1500 万。6降温与平衡时间稀释后的精液在30 ℃～35 ℃ 范围采用逐渐降温法，在1 h～2 h 内使稀释后的精液温度降至4 ℃，并在恒温容器内平衡2 h～4 h 。降温精液稀释后经1 h左右逐步降温至3 °C～5 °C。平衡时间为3 h～4 h。注意事项制备细管冻精的操作室应清洁干净，易于消毒并具有消毒设施，操作人员必须严格遵守实验室着装要求进行无菌操作，严格禁止异味存在(酒昧、烟味)。降温平衡后精液在封装打印前，匀速充分