DB53/T 939-2019 家畜体细胞系建立与冷冻保存

ICS65.020.30

B40

云南省地方标准

DB53/T939—2019

家畜体细胞系建立与冷冻保存

2019-09-23发布2019-12-23实施

云南省市场监督管理局发布

DB53/T939—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

本标准由云南省农业厅提出。

本标准由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。

本标准起草单位：云南省畜牧兽医科学院。

本标准主要起草人：洪琼花、吕春荣、权国波、邵庆勇、吴国权、欧阳依娜、杨红远。

I

DB53/T939—2019

家畜体细胞系建立与冷冻保存

1范围

本规程规定了家畜体细胞系建立、冷冻保存方法、细胞系命名。

本规程适用于猪、牛、羊、马等家畜体细胞系建立、冷冻保存与细胞系命名。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

原代培养

是指直接从家畜组织或器官，将其分散成细胞后开始的培养。

2.2

细胞系

指原代细胞培养物经首次传代成功后所增殖的细胞群体，可泛指一般可能连续传代的细胞。

3工作区条件

洁净环境下，无菌操作。

4体细胞系的建立

4.1试剂

无钙、镁的磷酸缓冲盐溶液，含有4.00mML-谷氨酰胺，4500mg/L葡萄糖的高糖DMEM，胎牛血清，

1%双抗，蛋白酶－乙二胺四乙酸：0.25%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸（EDTA），二甲基亚砜（DMSO）。

4.2培养液

高糖DMEM，10%～15%胎牛血清，1%双抗。

4.3样品采集、保存与运输

4.3.1采样个体选择

选取系谱清楚、生长发育良好、健康无病的青幼年个体。

4.3.2采集耳缘组织样本

采集耳缘组织按以下步骤进行：

1

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a)先刮净采样部位耳毛，再用碘酒、75%的酒精消毒。

b)用消毒过的采样工具采取样品。

c)样品放入5mL～10mL备有培养基的离心管中，并封口。

d)标记样品名称、性别、年龄、采样地点、采样部位、个体编号及采样时间等信息，记录表参见

附录A中表A.1。

4.3.3样品保存与运输