GB/T 45101-2024 动物炭疽诊断技术

ICS11220

CCSB.41

中华人民共和国国家标准

GB/T45101—2024

动物炭疽诊断技术

Diagnostictechniquesforanimalanthrax

2024-12-31发布2025-07-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T45101—2024

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

缩略语

4……………………1

生物安全措施

5……………1

临床诊断

6…………………2

流行特点

6.1……………2

临床症状

6.2……………2

病理变化

6.3……………2

结果判定

6.4……………3

样品的采集保存运输和处理

7、、…………3

样品的采集

7.1…………………………3

样品的保存与运输

7.2…………………3

样品的处理

7.3…………………………3

实验室诊断

8………………4

染色镜检

8.1……………4

分离与鉴定

8.2…………………………5

噬菌体裂解试验和青霉素抑制试验

8.3γ……………6

8.4PCR…………………6

8.5Real-timePCR………………………8

环状沉淀试验试验

8.6(Ascoli)………………………9

综合判定

9…………………10

附录规范性试剂的配制

A()……………11

草酸铵结晶紫染色液

A.1……………11

革兰氏碘液

A.2………………………11

沙黄复染液

A.3………………………11

碱性美蓝染色液

A.4…………………11

马或羊血琼脂平板

A.55%~7%……………………11

琼脂平板

A.6PLET……………………11

普通营养肉汤

A.7……………………11

普通营养琼脂平板

A.8………………11

Ⅰ

GB/T45101—2024

碳酸氢钠琼脂平板

A.90.7%…………11

电泳缓冲液

A.1050×TAE……………12

琼脂糖凝胶

A.112%…………………12

苯酚生理盐水

A.120.5%………………12

附录资料性核酸检测用引物探针序列信息及扩增结果图

B()、……13

炭疽杆菌引物

B.1PCR………………13

炭疽杆菌扩增产物电泳图

B.2PCR…………………13

引物和探针

B.3Real-timePCR………………………13

炭疽杆菌基因实时荧光扩增曲线图

B.4PAPCR…………………14

炭疽杆菌基因实时荧光扩增曲线图

B.5CAPCR…………………14

附录资料性炭疽杆菌阳性对照重组质粒的目的基因序列

C()PCR………………15

炭疽杆菌保护性抗原基因重组质粒参考序列

C.1(PA)……………15

炭疽杆菌荚膜基因重组质粒参考序列

C.2(CA)……………………15

附录资料性环状沉淀试验结果图

D()…………………16

参考文献

……………………17

Ⅱ

GB/T45101—2024

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由中华人民共和国农业农村部提出

。

本文件由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本文件起草单位中国农业科学院北京畜牧兽医研究所军事科学院军事医学研究院军事兽医研究

:、

所中国兽医药品监察所北京市动物疫病预防控制中心

、、。

本文件主要起草人丁家波秦彤祝令伟蒋卉郭学军张莹辉范学政彭小薇冯宇王林

:、、、、、、、、、、

程汝佳

。

Ⅲ

GB/T45101—2024

引言

炭疽是由炭疽芽孢杆菌Bacillusanthracis引起的一种人兽共患急性热性败血性传

(Anthrax)()、、

染病广泛分布于世界各地该病主要发生于畜间以牛羊马等草食动物最为易感杂食动物次之人

,。,、、,,

主要通过接触患炭疽的动物或污染的动物制品环境感染而患病动物感染炭疽主要分为最急性型急

、。、

性型亚急性型和慢性型的临床类型各类型病死率均较高危害严重人畜健康世界动物卫生组织

、,,。

将其列为必须报告的动物疫病我国将其列为二类动物疫病

(WOAH),。

本文件的制定参考了陆生动物诊断试验和疫苗手册年版章炭疽诊断技

WOAH《》(2023)3.1.1

术并结合了我国相关技术研究新成果

,。

Ⅳ

GB/T45101—2024

动物炭疽诊断技术

1范围

本文件描述了动物炭疽的临床诊断染色镜检分离与鉴定噬菌体裂解试验青霉素抑制试验

、、、γ、、

环状沉淀试验等实验室诊断方法

PCR、Real-timePCR、。

本文件适用于动物炭疽的诊断检测检疫监测和流行病学调查

、、、。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

,,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

实验室生物安全通用要求

GB19489

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义

。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

值循环阈值

Ct:(CycleThreshold)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(Diethypyrocarbonate)

脱氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

乙二胺四乙酸

EDTA:(EthyleneDiamineTetraaceticAcid)

羧基荧光素

FAM:6-(6-Carboxy-Fluorescein)

非荧光淬灭剂小沟结合物

NFQ-MGB:-(Non-FluorescentQuencher-MinorGrooveBinder)

聚合酶链式反应

PCR:(PolymeraseChainReaction)

多黏菌素溶菌酶乙二胺四乙酸乙酸亚铊

PLET:B---(PolymyxinB-Lysozyme-EDTA-Thallousace-

tateAgar)

实时荧光

Real-timePCR:PCR(Real-timePolymeraseChainReaction)

三羟甲基氨基甲烷乙酸乙二胺四乙酸醋酸缓冲液

TAE:--(Tris-Acetate-EDTABuffer)

5生物安全措施

严禁在非生物安全条件下进行疑似炭疽患病动物患病动物的尸体剖检采样及样品处理过程中

、。

应采取必要的防护措施防止感染人员及污染环境从事炭疽诊断活动的实验室应按照的

,。GB19489

规定进行风险评估和风险控制

。

1

GB/T45101—2024

6临床诊断

61流行特点

.

611易感动物

..

所有哺乳动物包括人类和一些鸟类都可感染炭疽其中草食动物最易感

,,。

612传染源

..

患病动物和因炭疽而死亡的动物尸体以及受其污染的土壤草地水和饲料是主要传染源炭疽芽

、、,

孢对环境具有很强的抵抗力其污染的土壤和场地可形成持久的疫源地

,。

613传播途径

..

主要经皮肤消化道和呼吸道传播动物破损的皮肤黏膜直接接触病原菌采食被污染的饲料饲

、。,、

草及饮水等以及吸入带炭疽芽孢的尘埃飞沫等都可导致炭疽感染也可通过昆虫叮咬传播

,、,。

614流行特征

..

呈地方性散发流行有一定的季节性多发生在吸血昆虫多雨水多和洪水泛滥的季节

。,、。

62临床症状

.

621最急性型

..

多见于反刍动物无明显临床症状即突然死亡动物死前数小时仍健康濒死时常见体温高达

,。,

肌肉震颤呼吸困难黏膜充血随即动物间歇性抽搐虚脱死亡死后血液凝固不良肛门阴

42℃,,,,、、。,、

门鼻腔口腔等天然孔流出血液并常见尸僵不全

、、,。

622急性型

..

多见于牛临床表现为兴奋后又高度沉郁前期体温升高后期体温下降呼吸急促心跳加快反刍

,,,,,

停止黏膜充血水肿一般经后死亡也常见于马随感染部位不同而表现不同摄入芽孢后

,、,1d~2d。,,

引起明显腹痛伴有高热和精神沉郁一般经后死亡皮下感染芽孢如通过昆虫叮咬可引起

,,2d~4d;()

该部位发热疼痛水肿后出现在咽喉胸廓腹部包皮乳房等部位喉部肿胀会引起呼吸困难并压迫

、、,、、、、,

气管病程长短不一最终死亡

,,。

623亚急性型和慢性型

..

多见于家养或野生的猪犬和猫动物常因采食被炭疽杆菌污染的饲料而发生感染可见颈胸

、,。、、

腰直肠或外阴部发生水肿局部温度增高有时龟裂渗出淡红黄色液体颈部水肿可波及咽喉加重

、,,,。,

呼吸困难有些动物发病几天后可以康复部分动物表现为严重的胃肠炎和咽炎等症状也可见在唇

。。,、

舌及硬腭等黏膜的痈性肿胀

。

63病理变化

.

631反刍动物常见血液不凝呈暗色脾肿大呈黑草莓样有大量特征性败血症的出血点

..,,,,。

632马病理变化基本与反刍动物相同有些马的喉部与颈部常可能出现水肿而内部器官无此变化

..,,。

633猪和肉食动物可常见如同反刍动物的败血性变化但大多数只在喉部出现严重水肿和炎症胃

..