DB33/T 2269-2020 猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR检测方法

ICS11.220

B41

DB33

浙江省地方标准

DB33/T2269—2020

猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR

检测方法

DuplexfluorescencequantitativePCRmethodforthedetectionofporcine

circovirustype2andtype3

2020-06-30发布2020-07-30实施

浙江省市场监督管理局发布

DB33/T2269—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由浙江省农业农村厅提出。

本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：浙江农林大学。

本标准主要起草人：宋厚辉、邵春艳、周莹珊、王晓杜、孙静、姜胜、杨永春、程昌勇、章先、杨

杨、卫芳芳。

I

DB33/T2269—2020

猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR的检测方法。

本标准适用于猪圆环病毒2型与3型的核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Ct值：达到阈值的循环数（Cyclethreshold）

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSolution）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

PCV-2：猪圆环病毒2型（PorcineCircovirus2）

PCV-3：猪圆环病毒3型（PorcineCircovirus3）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

4试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯；灭菌水，0.01mol/LPBS和8mmol/LNaOH配制中所使用的

水应符合GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法中一级水的要求。

4.1DNAzolReagent：DNA抽提试剂，2℃～8℃保存。

4.2无水乙醇：4℃预冷。

4.375%乙醇：用无水乙醇和灭菌水配制，-20℃预冷。

4.48mmol/LNaOH溶液：配制方法见附录A。

4.50.01mol/LPBS，pH7.2：配制方法见附录A。

4.62×PremixHSTaq（内含PCRbuffer，HSTaq，dNTPs，Mg2+，RNaseH等）。

4.7阳性对照：猪圆环病毒2型灭活疫苗和猪圆环病毒3型阳性克隆质粒。PCV-3目的基因（ORF2）

序列见附录A。

4.8空白对照：灭菌水。

4.9用于荧光定量PCR的引物浓度为10µmol/L，Taqman探针浓度5µmol/L，其序列分别为：

——PCV-2-F：5’-TCACCTATGACCCCTATG-3’；

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