WS/T 421-2013 抗酵母样真菌药物敏感性试验 肉汤稀释法

ICS11.020

C50

中华人民共和国卫生行业标准

/—

WST4212013

抗酵母样真菌药物敏感性试验

肉汤稀释法

ㅤㅤㅤㅤ

—

AntifunalsuscetibilittestinofeastsBrothdilutionmethod

gpygy

2013-07-16发布2013-12-01实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布

/—

WST4212013

目次

前言…………………………Ⅰ

1范围………………………1

2术语和定义………………1

3抗真菌药物………………2

4培养基……………………5

5宏量肉汤稀释法操作步骤………………5

6微量肉汤稀释法操作步骤………………6

7质量控制…………………8

()

附录A规范性附录RPMI-1640肉汤培养基配方表………………11

()

附录B规范性附录0.5麦氏单位硫酸钡浊度标准管制备步骤……12

()

附录C规范性附录酵母样真菌体外药敏试验结果解释……………13

参考文献……………………14

ㅤㅤㅤㅤ

/—

WST4212013

抗酵母样真菌药物敏感性试验

肉汤稀释法

1范围

本标准规定了用经典的宏量肉汤稀释方法()检测抗酵母样真菌的最

BrothMacrodilutionmethod

(,),

小抑菌浓度MinimalInhibitorConcentrationMIC的参考方法并推荐了与本参考方法的结果具有

y

良好一致性的微量肉汤稀释方法()。

BrothMicrodilutionmethod

(),

本标准适用于酵母及酵母样真菌引起的深部真菌感染的药物敏感性试验包括念珠菌属

()和新生隐球菌。不适用双相真菌,

Candidas.含光滑念珠菌C.labrataCrtococcusneoormens

ppgypf

如皮炎芽生菌Blastomcesdermatitidis荚膜组织胞浆菌Histolasmacasulatum荚膜亚种。

ypp

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

抗真菌药物antifunalaents

gg

用于人体内对、,、

真菌具有抑制生长或杀灭作用的生物物质半合成或合成物质不包括消毒剂灭菌

ㅤㅤㅤㅤ

剂和防腐剂。

2.2

最小抑菌浓度;

minimalinhibitorconcentrationMIC

y

,。

在琼脂或肉汤稀释法中抗菌药物能抑制微生物生长的最低浓度

2.3

折点breakoint

p

、、。

临床上能将真菌分为敏感中介耐药的特定MIC值

折点系综合体外值、/、,(、

MICPKPD数据临床疗效而得出还可随环境改变而变化如感染部位常

、)。

规药物剂量的改变使用途径及次数的改变

2.4

敏感;

suscetibleS

p

,。

此浓度在体外检测中能抑制真菌生长当使用推荐剂量时在临床治疗中很有可能取得成功

2.5

中介;

intermediateI

,()

菌株对常规用药时体液和组织中能达到的药物浓度反应率低于敏感株和或不能被清楚地划分为

“”“”。,。

敏感或耐药在体外真菌可被抑制生长此浓度临床治疗效果不肯定如为药物聚集部位或高剂量

,。,、。

使用则临床治疗有效该范围可作为一缓冲区避免由于微小不可控的技术因素导致严重解释偏差

2.6

耐药;

resistantR

当使用推荐剂量时在临床治疗中很有可能失败。

2.7

剂量依赖性敏感;

suscetible-dosedeendentS-DD

pp

当使用比常规用药更高剂量或更高血药浓度时能够取得疗效。

1

/—

WST4212013

2.8

非敏感;

non-suscetibleNS

p

,,。

当前仅有敏感解释但无中介或耐药解释类型的微生物多用于仍未遇到耐药菌株的新抗菌药物

2.9

效价otenc

py

,。/、/,

抗菌药物中具有抗菌活性的部分通过同类标准物质测定得出单位表示为mIU或用百

ggg

分比表示。

2.10

质量控制;

ualitcontrolC

qyQ

为保证检测的准确性和可重复性而采取的方法或技术。

3抗真菌药物

3.1抗真菌药物标准品或参考品

。,

抗真菌药物标准品或参考品可从药物生产厂家直接购买得到使用有效期内的标准品在厂家推

。,。

荐的条件下贮存当从低温下取出药物时需恢复到室温后再开瓶药物称量按照配制贮存液的浓度

,。,。

计算浓度为检测时使用浓度的100倍称量应在分析天平上进行天平应定期校准

3.2称量药物

()、():

计算药物质量及稀释液体积见式1式2

·V

ㅤㅤㅤㅤ

ρ…………()

m=1

τ

·

mτ

V…………()

=2

ρ

式中:

———,();

m药物的质量单位为毫克mg

———,(/);

ρ药物的浓度单位为微克每毫升μgmL

———,(/);

τ药物的效价单位为微克每毫克m

μgg

———,()。

V药物的体积单位为毫升mL

()

3.3药物储存液母液

3.3.1溶剂

,()。。(

溶解时一些药物需使用非水溶剂溶解见表1溶剂的信息可参考厂家说明书溶剂包括分析

):()、、、。

级别二甲基亚砜DMSO乙醇聚乙二醇羧甲基纤维素

、

表1抗真菌药物储存液使用的溶剂稀释液和检测范围

检测范围

抗真菌药物溶剂a稀释液

μg/mL

两性霉素BDMSOb培养基c0.0312~16

氟康唑水培养基0.125~64

伊曲康唑DMSOb培养基0.0156~8

2

/—

WST4212013

表()

1续

检测范围

抗真菌药物溶剂a稀释液

μg/mL

伏立康唑DMSOb培养基0.0156~8

泊沙康唑DMSOb培养基0.0156~8

氟胞嘧啶水培养基0.125~64

卡泊芬净水培养基0.0312~16

米卡芬净水培养基0.0312~16

安尼芬净DMSOb培养基0.0312~16

a

,。

某些溶剂存在潜在毒性使用前应咨询制造商

b

DMSO表示二甲基亚砜。

c

,。

培养基指RPMI-1640肉汤培养基配制见表2

表2RPMI-1640肉汤培养基1L制备步骤

步骤过程

a

肉汤干粉,,蒸馏水

110.4RPMI-164034.53MOPS缓冲液溶解于900mL

gg

ㅤㅤㅤㅤ

(/),

2加入MOPS终浓度为0.165molL搅拌至溶解

使用/氢氧化钠调至()

31molLpH7.025℃

4补水至1L

5过滤消毒储存在4℃备用

a()()。

表示吗啡啉丙磺酸

MOPS3-N-3-N-morholinoroanesulfonicacid

ppp

3.3.2过滤

,,、

通常认为储存液是无菌的当有特殊要求时应进行膜过滤但应避免使用纸张石棉和玻璃滤器等

具有吸附抗真菌药物的材质。

3.3.3保存

,。

储存液应分装在塑料管中密封保存在-60℃环境中保存温度不能高于-20℃应在从冰箱中

,,。。

取出的当天使用现用现取未用完的应丢弃大多数药物的储存液在可保存个月

-60℃6

3.4药物稀释液

3.4.1水溶性抗真菌药物

,(),

对于溶于水的抗真菌药物用稀释液肉汤将倍终浓度储存液倍稀释最后与

RPMI-164010010

,。

菌液1∶9混合步骤见表3

3

/—

WST4212013

表3水溶性抗真菌药物稀释步骤

浓度体积培养基中间浓度终浓度1∶10

步骤来源log

2

μg/mLmLmLμg/mLμg/mL

15120储存液1.07640646

2640步骤11.01.0320325

3640步骤11.03.0160164

4160步骤31.01.08083

5160步骤30.51.54042

6160步骤30.53.52021

720步骤61.01.01010

820步骤60.51.550.5-1

920步骤60.53.52.50.25-2

102.5步骤91.01.01.250.125-3

112.5步骤90.51.50.6250.0625-4

122.5步骤90.53.50.31250.03125-5

3.4.2非水溶性抗真菌药物

ㅤㅤㅤㅤ

(、、、、),

对于不溶于水的抗真菌药物如两性霉素B伊曲康唑伏立康唑泊沙康唑阿尼芬净需先用合

,,

适的溶剂配制终浓度倍的储存液再用肉汤倍稀释成终浓度的倍后最后与菌

100RPMI-16401010

,。

液1∶9混合步骤见表4

表4非水溶性抗真菌药物稀释步骤

溶剂

浓度体积中间浓度终浓度1∶100

步骤来源(a)

如DMSOlog

2

μg/mLmLμg/mLμg/mL

mL

储存液/

116001600mL164

μg

21600储存液0.50.58008