DB45/T 2311-2021 牛传染性鼻气管炎病毒的检测 巢式 聚合酶链反应法

ICS11.220

CCSB441

45

广西壮壮族族自自治区地方标准标准

DBB45/T2311—2021

牛传传染性鼻气气管炎炎病毒毒的检检测巢式式聚合

酶酶链反反应法

Detecttiofionnfectiouubovinseerhinotrracheitiviruss——Nestedppolymerase

cchainreaaction

2021--04-25发布2021-005-31实施

广西壮壮族自治区区市场监督督管理局发布布

DB45/T2311DB45/T—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1.1—2020《标准化工作导则本文件按照GB/T

起草。

请注意本文件的某些内家可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。

本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：广西壮族自治区兽医研究所。

本文件主要起草人：范晴、张民秀、王盛、李小凤、李丹、万丽军、阮志华、任红玉。

II

DB45/T2311DB45/T—2021

牛传染性鼻气管炎病毒的检测巢式聚合酶链反应法巢式聚合酶链反应法牛传染性鼻气管炎病毒的检测

11范围

本文件规定了巢式聚合酶链反应法检测牛传染性鼻气管炎病毒的材料准备、操作方法及结果判定。

本文件适用于广西行政区域内牛传染性鼻气管炎病毒的检测。

22规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T31190实验室废弃化学品收集技术规范实验室废弃化学品收集技术规范31190GB/T

33术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.13.1

牛传染性鼻气管炎病毒infectiousbovinerhinotracheitisvirusvirusrhinotracheitisbovineinfectious牛传染性鼻气管炎病毒

属疱疹病毒科，水痘病毒属，基因组为双链DNA。属疱疹病毒科，水痘病毒属，基因组为双链DNA。

3.23.2

聚合酶链反应polymerasechainreactionreactionchainpolymerase聚合酶链反应

简称PCR技术，片段是一种用于放大扩增特定的DNA的分子生物学技术。

3.33.3

巢式PCRreactionchainpolymerasenested反应

简称NestedPCR，PCR技术的一简称Nested种特殊形式，扩增的在常规PCR常规片断内再设计一对新的引物，对

产物进PCR的扩增行二次PCR更短，扩增出比常规PCR的产物，可显著提高其检测的敏感度。

3.43.4

引物primersprimers引物

与待扩增DNA片段两侧互补的一小段寡核苷酸。

3.53.5

外套引物outerprimersprimersouter外套引物

用于第一次PCR的引物。用于第一次PCR的引物。

3.63.6

内套引物innerprimersprimersinner内套引物

次PCR的引物。用于第二次PCR的引物。

44缩略语

下列缩略语适用于本文件。

IBRV：牛传染性鼻气管炎病毒（infectiousbovinerhinotracheitisuvirs）

1

DB45/T2311DB45/T—2021

PCR：聚合酶链反应（polymerasechainreaction）

55材料准备

5.15.1IBRV特异性引物

引物序列见附录A中的A.1.1。外套引物F1和F2扩增的目的片段为416bp，内套引物F3和F4扩增的目

的片段为334bp，引物使用浓度均为50pmol/μL，置于-20℃保存。

5.25.2试剂

5.2.15.2.1DNA抽提试剂

如下：

——TrizolDNA抽提试剂1)(或其它等效抽提剂)；

——氯仿；

——异丙醇；

——75％乙醇；

——100％乙醇；

——0.1mol/L柠檬酸钠乙醇；

——8mmol/LNaOH。

5.2.25.2.2PCR试剂盒

如下：

——TaqDNA聚合酶；

——dNTPs混合物：包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP；

——10倍PCR缓冲液（含Mg2+）。

注：试剂盒包含了PCR扩增所必需的各种酶、dNTPs及Mg2+等全部试剂。

5.2.35.2.3电泳试剂

如下：