DB13/T 5143-2019 畜禽组织及体液中多种抗生素残留快速检测 微生物抑制法

ICS07.080

B41

DB13

河北省地方标准

DB13/T5143—2019

畜禽组织及体液中多种抗生素残留

快速检测微生物抑制法

2019-12-27发布2020-01-28实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5143—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北省农业农村厅提出。

本标准起草单位：河北省兽药监察所、河北科星药业有限公司、北京中检葆泰生物技术有限公司、

邢台市动物卫生监督所、衡水市农业环境与农畜产品质量监督管理站、沧州市农产品质量检验监测中

心、承德市畜禽水产品质量检验监测中心、石家庄市畜产品质量监测中心、石家庄市畜牧兽医技术开

发中心、唐山市食品药品综合检验检测中心。

本标准主要起草人：刘怡菲、王萍、王振来、刘龙飞、牛志勇、钱春彩、段培姿、王爱卿、刘力、

李云、张峰、闫超、李海龙、李文香、李研东、武侠均、赵芳、崔沙沙、陈宝明、李肖莉。

I

DB13/T5143—2019

畜禽组织及体液中多种抗生素残留快速检测

微生物抑制法

1范围

本标准规定了畜禽组织及体液中β-内酰胺类、磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、氨基

糖苷类、酰胺醇类七大类抗生素残留的微生物抑制法的制样和检测方法。

本标准适用于畜禽肾脏、肝脏、肌肉、血清和尿液中β-内酰胺类、磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、

大环内酯类、氨基糖苷类、酰胺醇类七大类抗生素残留的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

通过抑制微生物生长的检测方法来检测畜禽组织或体液中的抗生素。细菌在含有pH指示剂的琼脂

中培养，使用拭子对畜禽组织或体液进行提取，如果样品中不含有抗生素，细菌生长不受抑制，产生

的酸会使含有紫色指示剂的琼脂变成黄色；如果样品中含有抗生素，细菌生长会受到抑制，指示剂显

示紫色。

4试剂和材料

除另有说明外，本法所用的试剂确认为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的二级水。

4.1检测试剂盒

a)检测棒；

b)取样拭子；

c)洗脱反应缓冲液；

d)检测微管（含有微生物的固化培养基）；

e)阴性质控片：冷藏保存（2℃～8℃）；

f)阳性质控片Ⅰ：青霉素G标准品固体；

g)阳性质控片Ⅱ:庆大霉素标准品固体；

h)反应药片：用于尿液和血清样品的检测，冷藏保存（2℃～8℃）。

注：检测试剂盒是由CharmScience公司提供的产品。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产

品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。

4.2阴性质控样品制备

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DB13/T5143—2019

4.2.1组织类阴性质控样品制备：取出1片阴性质控片（4.1.2）放置在提供的带有螺帽的离心管中，

加入1.0mL水，振荡10s使阴性质控片（4.1.2）充分溶解。放置5min后再次振荡，制成阴性质控

样品溶液,冷藏保存（2℃～8℃）,保存期为5d。

4.2.2血清和尿液阴性质控样品：直接使用阴性血清或阴性尿液样品作为阴性质控样品。

4.3阳性质控样品Ⅰ的配制（用于肾脏、肝脏、肌肉、家畜血清和尿液样品的测定）：用0.8mL阴

性质控样品（4.2）溶解阳性质控片Ⅰ（4.1.3），制成浓度为50ng/mL的阳性质控样品Ⅰ。阳性质控

样品Ⅰ可冷藏保存（2℃～8℃）72h；制备后6h内置于-15℃以下冷冻，可保存3周，解冻的阳性质

控样品可冷藏保存（2℃～8℃）24h。

4.4阳性质控样品Ⅱ制备（用于家禽血清样品的检测）：用10mL水溶解阳性质控片Ⅱ（4.1.4），

制得浓度为5000ng/mL的标准溶液。取0.75mL上述标准溶液，加入4.25mL阴性血清，制得阳性质控

样品Ⅱ，庆大霉素浓度为750ng/mL。

5仪器设备

a)孵育器：温度设置64℃±1℃；

b)结果判读卡：见附录B；

c)离心机：最高离心力大于1200g；

d)移液器及吸头：100μL～1000μL、20μL～200μL和1mL～5mL；

e)离心管：2mL、10mL和50mL。

注：结果判读卡是由Charmcience公司提供的产品。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产

品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。

6分析步骤

6.1试样制备

6.1.1肾脏和肝脏样品制备

将取样拭子（4.1.1.1）从检测棒中拔出,使用检测棒露出的开口端，插入新鲜的肾脏或肝脏皮质

约1cm～2cm做环形切割，取渗出液用于检测。

6.1.2肌肉样品制备

将肌肉样品匀质后速冻，然后快速解冻，将取样拭子（4.1.1.1）从检测棒中拔出,使用检测棒露

出的开口端，插入肌肉组织约1cm～2cm做环形切割，取渗出液用于检测。

6.1.3血清样品制备

将血液收集于50mL离心管（5.5）中，放置4h，弃去凝块，离心剩余液体（1200g，5min），收

集上清液。

移取500μL上清液至离心管中。加入反应药片（4.1.5），盖上离心管，10s内点动式涡旋混合

10次，翻转3～5次，确保药片充分溶解。再次10s内点动式涡旋混合10次，静置1min。

6.1.4尿液样品制备

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DB13/T5143—2019

移取500μL清亮的尿液于离心管中（如尿液浑浊，则1200g离心5min，取上清液备用），加入反

应药片（4.1.5）。盖上离心管，10s内点动式涡旋混合10次，翻转3～5次，确保药片充分溶解。再

次10s内点动式涡旋混合10次，静置1min。

6.2样品移取

6.2.1肾脏、肝脏和肌肉样品

握住取样拭子（4.1.1.1），将棉签头插入肾脏、肝脏或肌肉组织的环形切口，顺时针移动同时旋

转约30s，使拭子吸附汁液至完全浸湿，去除拭子上的组织颗粒。

6.2.2血清和尿液样品

打开离心管，将取样拭子（4.1.1.1）从检测棒中拔出，浸入样品上清液中，浸泡10s。

6.3样品检测

6.3.1将孵育器（5.