DB37/T 3880-2020 鸭疫里默氏杆菌病诊断技术规程

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T3880—2020

鸭疫里默氏杆菌病诊断技术规程

DiagnostictechniquesforRiemerellaAnatipestiferinfection

2020-03-16发布2020-04-16实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T3880—2020

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院家禽研究所、山东省动物疫病预防与控制中心、威海市畜牧业

发展中心、临沂市畜牧发展促进中心。

本标准主要起草人：黄兵、李玉峰、马秀丽、于可响、宋敏训、赵国清、秦卓明、刘存霞、林树乾、

陈静、谭善杰、郭效珍、赵巧雅。

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鸭疫里默氏杆菌病诊断技术规程

1范围

本标准规定了鸭疫里默氏杆菌病的临床诊断、细菌分离、病原核酸检测和综合判定的技术要求。

本标准适用于鸭疫里默氏杆菌病的诊断与检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3临床诊断

3.1流行病学

该病一年四季均可发生，鸭、鹅、野生水禽和火鸡均可发病，1周龄~8周龄鸭高度敏感，5周龄以下

死亡较快，较大的鸭可能存活时间较长，该病在种鸭中少见。

3.2临床症状

3.2.1最急性型

很少出现明显症状即突然死亡。

3.2.2急性型

常见于2周龄～3周龄的雏鸭，病程1日～3日。患鸭精神沉郁、嗜睡、厌食、离群、不愿走动或行动

迟缓，眼鼻分泌物增多，患鸭呼吸困难、缩颈或以喙抵地，濒死期出现神经症状呈角弓反张、抽搐等。

3.2.3慢性型

常见于4周龄～7周龄鸭，病程可达一周以上。主要表现为精神沉郁、厌食、腿软弱无力、不愿走动、

伏卧或呈犬坐姿势，共济失调、痉挛性点头或头左右摇摆，难以维持躯体平衡，部分病例头颈歪斜，当

遇到惊扰时呈转圈运动或倒退，部分患鸭跛行。感染后存活的鸭往往生长迟缓。

3.3病理变化

特征性病变为病死鸭浆膜出现广泛性的纤维素性渗出，包括心包炎、气囊炎和肝周炎。慢性病例可

见脑炎。

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3.4判定标准

若发病鸭符合3.1流行病学特征、3.2临床症状和3.3病理变化，可判为鸭疫里默氏杆菌病疑似病例，

应进行细菌分离和核酸检测确诊。

4实验室诊断

除非另有规定，实验室诊断所用化学试剂均为分析纯；试验用水符合GB/T6682二级水的规定；实

验室生物安全要求按照GB19489执行。

4.1细菌分离

4.1.1仪器和设备

4.1.1.1生物安全柜。

4.1.1.2CO2培养箱。

4.1.1.3显微镜。

4.1.2试剂或材料

4.1.2.1血清琼脂平板（见附录A.1）。

4.1.2.2麦康凯琼脂平板（见附录A.2）。

4.1.2.3革兰氏染色液。

4.1.2.4瑞氏染色液。

4.1.3操作步骤

4.1.3.1取样

按NY/T541要求无菌采集发病鸭的肝脏或脑（有典型纤维素性渗出时采集肝脏，有神经症状时采集

脑）。

4.1.3.2分离培养

将接种环伸入组织内部，然后划线接种于血清琼脂平板和麦康凯琼脂平板，平板的配制根据根据

GB4789.28的规定进行操作，含5%～10%CO2的37℃培养箱或烛缸中培养24h～48h。挑取符合4.1.3.3

描述的典型菌落，划线接种于血清琼脂平板进行纯化培养。

4.1.3.3菌落形态

在血清琼脂平板培养基上见有湿润、呈露滴样、圆形隆起、表面光滑、边缘整齐的菌落，直径为1mm～

2mm，颜色为灰白色；而麦康凯琼脂平板上无菌落生长。挑选单个典型菌落进行革兰氏染色和瑞氏染色，

并镜检。革兰氏阴性，为无鞭毛、不运动、不形成芽胞的小杆菌。单个、成双或呈短链状排列，菌体形

态除杆状外，部分呈椭圆形，偶见呈长丝状。细菌大小宽为0.2μm～0.5μm，长为1μm～5μm，呈丝

状的菌体可长达11μm～24μm。瑞氏染色可见大多数菌体呈两极着染。

4.1.4结果判定

分离的细菌如同时符合4.1.3.3和4.1.3.4，可判定为疑似鸭疫里默氏杆菌。

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4.2病原核酸检测

4.2.1PCR方法

4.2.1.1仪器和设备

4.2.1.1.1高速冷冻离心机。

4.2.1.1.2PCR扩增仪。

4.2.1.1.3电泳仪。

4.2.1.1.4紫外分析仪。

4.2.1.1.5微量加样器：0.5µL～10µL；2µL～20µL；20µL～200µL；100µL～1000