T/LNSI 001-2023 人羊膜间充质干细胞

范围:本文件规定了人羊膜间充质干细胞的技术要求、检验方法、检验规则、使用说明、标签、包装、储存、运输和废弃物处理要求。 本文件适用于人羊膜间充质干细胞的生产和检测; 主要技术内容:5.1  原材料和辅料5.1.1  应符合T/CSCB 0001要求。5.1.2  应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细胞的安全。5.1.3  供体应筛查HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV和TP，并记录结果。5.2  分离与培养方法5.2.1  分离及提取人羊膜组织剪碎至糜状，以胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞。进行人羊膜间充质干细胞原代培养。5.2.2  人羊膜间充质干细胞换液根据细胞的生长情况换液。5.2.3  人羊膜间充质干细胞传代传代操作应密度适宜、及时、迅速。5.2.4  人羊膜间充质干细胞冻存冻存细胞程序降温后置液氮中保存。5.2.5  人羊膜间充质干细胞复苏取出冻存管进行快速融化，离心洗涤后进行培养。5.2.6  人羊膜间充质干细胞制剂制备人羊膜间充质干细胞溶液为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。5.3  关键质量属性5.3.1  细胞形态细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。5.3.2  染色体核型正常核型应为46,XX或46,XY。5.3.3  细胞存活率未冻存细胞存活率≥90%且冻存复苏后细胞存活率≥70%。5.3.4  细胞标志蛋白CD105、CD73、CD90阳性率均≥95%；CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45、HLA-DR阳性率≤2%。5.3.5  免疫调节经炎症因子（IFN-γ或者IFN-γ联合TNF-α）诱导后表达吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）。与T淋巴细胞共培养能抑制T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ、TNF-α。5.3.6  三系分化具有成骨、成脂、成软骨的分化潜能。5.3.7  成瘤性免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。5.3.8  微生物真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP为阴性。5.4  过程控制5.4.1  扩增、冻存、复苏等过程控制应符合T/CSCB 0001要求。5.4.2  细胞STR检测结果应与供体细胞保持一致。6  检验方法6.1  细胞形态二维培养条件下，用明视场细胞显微镜进行观察。6