DB33/T 963-2015 厚皮甜瓜种子纯度分子标记鉴定方法

ICS65.020.01

B05

DB33

浙江省地方标准

DB33/T963—2015

厚皮甜瓜种子纯度分子标记鉴定方法

PurityidentificationofMuskmelonvarietyusingmolecularmarkeranalysis

2015-05-07发布2015-06-07实施

浙江省质量技术监督局发布

DB33/T963—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由浙江省农业厅提出。

本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：宁波市农业科学研究院、宁波市种植业管理总站。

本标准主要起草人：宋慧、王毓洪、张香琴、臧全宇、陆惠斌、张庆、范雪莲。

I

DB33/T963—2015

厚皮甜瓜种子纯度分子标记鉴定方法

1范围

本标准规定了厚皮甜瓜种子纯度分子检测方法的术语与定义、原理、试剂、仪器设备、操作步骤和

样品纯度判定与计算。

本标准适用于厚皮甜瓜种子纯度鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

农业部1485号公告-4-2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

3术语与定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

品种纯度

品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示

[GB/T3543.5-1995，定义3.2]。

3.2

杂株

某差异位点杂交失败，该位点纯合的单株。

3.3

杂种一代

某差异位点杂交成功，该位点杂合的单株。

3.4

显性标记位点

仅能检测显性等位基因，不能够区分纯合和杂合基因型的遗传标记位点。

3.5

共显性标记位点

1

DB33/T963—2015

同时能检测出显性和隐性等位基因，能够区分纯合和杂合基因型的遗传标记位点。

3.6

随机扩增多态性DNA标记（RAPD）

以基因组DNA为模板，以单个人工合成的随机多态核苷酸序列（通常为10个碱基对）为引物，在热

稳定的TaqDNA聚合酶作用下，进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫外透

视仪上检测多态性。

3.7

简单重复序列标记（SSR）

根据真核生物中广泛存在的简单重复序列两端的互补保守区域设计引物。由于核心序列串联重复数

目不同，PCR扩增后获得的产物长度不同，通过高分辨率琼脂糖凝胶电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫

外透视仪上检测多态性。

4原理

从厚皮甜瓜幼苗新叶中提取基因组DNA，利用分子标记进行PCR扩增，扩增产物在琼脂糖凝胶的分子

筛效应和电泳分离的电荷效应作用下进行分离。通过溴化乙锭（EB）染色，在紫外光下发出荧光显示核

酸谱带差异。不同厚皮甜瓜品种由于遗传组成不同，引物结合后扩增产物不同，出现扩增产物有和无、

或者扩增片段大小不同的差异。这些差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对种子纯度进行鉴定。

5试剂

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和去离子水。

5.1引物

5.1.1RAPD

RAPD（RandomAmplifiedPolymorphicDNA）引物名称、序列及差异片段大小见表1。

表1RAPD引物名称、序列及差异片段大小

名称序列（5’-3’）差异片段大小（bp）

RAPD-1ACCTGGACAC1200/1400

RAPD-2C