T/CVDA 4-2022 动物中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体检测技术

范围:本标准规定了用于动物东呼吸综合征病毒血清中和抗体定量测定的病毒中和试验（VNT）的实验操作方法及结果判定标准。 本标准适用于动物血清中中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体的定性检测和定量测定; 主要技术内容:本技术标准适用于中东呼吸综合征病毒动物血清中和抗体检测，目的：常规的中东呼吸综合征病毒中和抗体检测需在生物安全3级实验室进行，不便于一般单位开展。本项目拟以一种更安全的重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS代替全病毒进行病毒中和抗体检测。本项目拟规定动物中东呼吸综合征病毒中和抗体检测技术的技术要求，建立动物中东呼吸综合征病毒中和抗体检测技术的诊断标准。意义：本项目检测技术大大降低了生物安全风险与要求，在常规生物安全2级实验室即可检测。提高了对动物中东呼吸综合征病毒中和抗体的检测能力，以便更好把握该病流行趋势，为制定有效防控措施提供参考，同时可为评价动物中东呼吸综合征疫苗免疫效果提供依据。本技术标准适用于中东呼吸综合征病毒动物血清中和抗体检测，通过血清中东呼吸综合征病毒中和抗体检测，辅助判断动物感染中东呼吸综合征病毒情况或评价动物中东呼吸综合征疫苗免疫效果。主要技术内容为：1、重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS质粒构建；2、重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS拯救；3、重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS鉴定与毒价测定；4、动物血清的采集与灭活；5、血清与重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS的中和与细胞接种；6、通过荧光灶观察与判定结果