GB/T 44829-2024 PfAgo核酸内切酶活性检测方法

ICS07080

CCSC.27

中华人民共和国国家标准

GB/T44829—2024

PfAgo核酸内切酶活性检测方法

AssaymethodofPfAgoendonucleaseactivity

2024-10-26发布2024-10-26实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T44829—2024

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

原理

4………………………1

试剂或材料

5………………1

试验步骤

6…………………2

质量控制

7…………………7

Ⅰ

GB/T44829—2024

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由全国工具酶标准化工作组提出并归口

(SAC/SWG11)。

本文件起草单位交弘生物科技上海有限公司菲鹏生物股份有限公司南生厦门分析检测有

:()、、()

限公司夏禾深圳生物技术有限公司厦门银祥集团有限公司深圳市新产业生物医学工程股份有限

、()、、

公司武汉新华扬生物股份有限公司廊坊诺道中科医学检验实验室有限公司交弘生物工程上海有

、、、()

限公司夏禾杭州生物技术有限公司福建南生科技有限公司上海交通大学复旦大学山东大学苏

、()、、、、、

州大学厦门大学福建农林大学厦门华厦学院

、、、。

本文件主要起草人冯雁李忠磊黄发灿郑登忠孟媛张志刚杜凯徐丽胖铁良赵毅陈礼师

:、、、、、、、、、、、

郭延巍刘倩潘威叶星宇孙鹏钟江陈秀兰方正伟于海岳余欣邓永江朱力张永有刘斌

、、、、、、、、、、、、、、

赵超郑恬烨黄恩铭皱忠爱潘排凤黄海燕苏静梅

、、、、、、。

Ⅲ

GB/T44829—2024

引言

Pf核酸内切酶能够在磷酸化的引导链大于的引导下剪切与引导链互

Ago5'DNA(15nt)DNA

补的靶标剪切位点一般在引导链端开始的第个和第个碱基相对应的靶标

DNA,DNA5'1011DNA

碱基之间Pf核酸内切酶的剪切功能不受靶标和剪切位点相邻碱基序列的限制对靶标

。AgoDNA,

底物的活性较高对靶标底物也有一定活性制定Pf核酸内切酶活性检测方法的国

DNA,RNA。Ago

家标准用以推动其产业化对该类工具酶的生产和使用具有重要意义

,,。

Ⅳ

GB/T44829—2024

PfAgo核酸内切酶活性检测方法

1范围

本文件描述了Pf核酸内切酶活性的检测方法

Ago。

本文件适用于Pf核酸内切酶活性的检测

Ago。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

包装储运图示标志

GB/T191—2008

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

PfAgo核酸内切酶PfAgoendonuclease

依托引导链序列与靶标序列碱基互补配

DNA(guideDNA,gDNA)DNA(targetDNA,tDNA)

对继而特异识别并剪切靶标的核酸内切酶

,DNA。

32

.

PfAgo核酸内切酶活性单位activityunitofPfAgoendonuclease

在反应体积中条件下每分钟剪切靶标所需的酶量为一个活性单位

25μL,95℃,0.1nmolDNA(U)。

4原理

依托引导链序列与靶标序列碱基互补配对Pf核酸内切酶能够在磷酸化的

DNADNA,Ago5'

引导链大于的引导下剪切与引导链互补的靶标剪切位点常发生在引

DNA(15nt)DNADNA,DNA

导链与靶标互补序列的靶标第位和第位碱基之间的磷酸二酯键处

DNADNA1011。

5试剂或材料

51水

.

符合规定的二级水

GB/T6682。

521mol/LTris-HClpH80

.(.)

称取加入超纯水中充分混匀后用盐酸调节至加入

Tris12.114g,80mL,6mol/LpH8.0±0.05,

超纯水定容至并用微孔滤膜对其过滤储存有效期为个月

100.0mL,0.22μm,2℃~8℃,24。

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