DB22/T 1745-2012 弓形虫聚合酶链式反应（PCR）检测方法

ICS11.220

B41

备案号：36036-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1745—2012

弓形虫聚合酶链式反应（PCR）检测方法

DetectionmethodofpolymerasechainreactionofToxoplasmagondii

2012-12-21发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1745-2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。

本标准主要起草人：姚新华、苑淑贤、任科研、曹利利、杨金生、程荣华。

I

DB22/T1745-2012

弓形虫聚合酶链式反应（PCR）检测方法

1范围

本标准规定了聚合酶链式反应（PCR）检测弓形虫的原理、实验材料、仪器设备、试剂、操作程序、

结果判定及废弃物处理和防止污染的措施。

本标准适用于PCR法检测弓形虫。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

PCR技术是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，

通过变性、退火、延伸周期性的多次循环，使两个引物之间的特异性DNA片段得到体外扩增。出现1080bp

电泳条带为阳性，其它为阴性。

4实验材料

4.1眼科剪。

4.2眼科镊。

4.3称量纸。

4.4一次性注射器10mL。

4.5无菌离心管1.5mL。

4.6薄壁PCR管0.2mL。

4.7琼脂糖。

4.8量筒500mL。

4.9锥形瓶500mL。

4.10吸头（10μL、200μL、1000μL）。

4.11灭菌双蒸水。

5仪器设备

5.1分析天平。

5.2PCR扩增仪。

5.3台式低温高速离心机。

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DB22/T1745-2012

5.4电泳槽。

5.5核酸电泳仪。

5.6紫外凝胶成像仪或凝胶成像系统。

5.7可调移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）。

5.8恒温水浴锅。

6试剂

6.1本标准所用试剂均为分析纯。

6.2无菌双蒸水符合GB/T6682-1992。

6.3溴化乙锭（EB）溶液10mg/mL：参见附录A.1。

6.4电泳缓冲液50×TAE：参见附录A.2。

6.51.5%琼脂糖凝胶：参见附录A.3。

6.6上样缓冲液：参见附录A.4。

6.710×PCR缓冲液：参见附录A.5。

6.8TaqDNA聚合酶2u/µL。

6.9dNTPs2.5mmol/L。

6.10标准分子量DL2000DNAMarker。

6.11引物与PCR扩增结果：参见附录