GB/T 27540-2011 猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

ICS11.220k___

B41G目

中华人民共和国国彖标准

GB/T27540—2011

猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionof

classicalswinefevervirus

2011-11-21发布2012-03-01实施

GB/T27540—2011

■ir■■i

刖吕

本标准按GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。

本标准起草单位：中国兽医药品监察所。

本标准主要起草人:王琴、王泰健、徐璐、范学政、刘俊、蒋春燕、赵启祖、宁宜宝、邹兴启。

T

GB/T27540—2011

猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSFV)实时荧光RT-PCR检测方法。

本标准适用于猪瘟的诊断和监测，适用于猪活体及其脏器、血液、排泄物和细胞培养物中CSFV核

酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CSFV:猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus)

Cl值:达到阈值的循环数(cyclethreshold)

DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate)

HSTaq酶：热启动TaqDNA聚合酶(HSTaqDNApolymerase)

RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)

荧光RT-PCR:荧光逆转录聚合酶链式反应(realtimefluorescentquantitativereverse

transcriptionpolymerasechainreaction)

4试剂和材料

除另有说明，所用试剂均为分析纯;所有试剂均用无RNA酶的容器分装。

4.1Trizol：RNA抽提试剂，外观为粉红色，分装至棕色瓶中，于4°C〜8°C保存。

4.2氯仿：4°C预冷。

4.3异丙醇：4°C预冷。

4.475%乙醇:用新开启的无水乙醇和DEPC水配制，一20°C预冷。

4.5DEPC水：去离子水中加入0.1%DEPC,37°C作用1h,(121±2)°C,高压灭菌15min。

4.6RNA酶抑制剂(30U/mL)o

4.710XPCRb