GB/T 22959-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04OB

中华人民共和国国家标准

GB/T22959—2008

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砚霉素

和氟苯尼考残留量的测

液相色谱-串联质谱法

Determinationofchloramphenicol,thiamphenicoland

florfenicolresiduesinfugu,eelandbakedeel—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

发布

GB/T22959—2008

刖

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人:林海丹、李宪华、谢守新、林峰、黄华军、邵琳智、庞国芳。

T

GB/T22959—2008

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砚霉素

和氟苯尼考残留量的测

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素(chloramphenicol)、甲砚霉素(thiamphenicol)和氟苯尼

考(florfenicol)及其代谢物氟苯尼考胺(florfenicolamine)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中的氯霉素、甲枫霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测。

本标准的方法检出限:河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素为0.1Mg/kg,甲砚霉素、氟苯尼考和氟苯尼考

胺为1.0(Llg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T6379.1-

2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696；1987,MOD)

3原理

样品中的氯霉素、甲砚霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在碱性条件下，用乙酸乙酯提取，提取液旋转蒸

发挥干，残渣以水溶解，经正己烷液液分配脱脂。液相色谱-串联质谱仪检测，氯霉素、甲砚霉素和氟苯

尼考以内标法峰面积定量，氟苯尼考胺以外标法峰面积定量。

4试剂

所用试剂除注明外均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2乙酸乙酯。

4.3正己烷。

4.4氨水：25%〜28%。

4.5无水硫酸钠：使用前经650°C灼烧4h。

4.6标准物质：氯霉素(CAS：56-75-7)、甲砚霉素(CAS：15318-45-3)和氟苯尼考(CAS：76639-94-6),纯

度》99.5%；氟苯尼考胺，纯度$98.0%。

4.7内标标准液:氛代氯霉素(也-氯霉素),100Mg/mL,溶剂为乙月青，氛化度$98%,

4.8100Mg/mL标准储备液:分别准确称取适量的氯霉素、甲砚霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺标准物

质(4.6),用甲醇分别配成100Mg/mL的标准储备液。该溶液于一18°C保存。

4.91(ug/mL氯霉素、甲砚霉素和氟苯尼考混合标准储备液:分别准确吸取1.00niL氯霉素、甲砚霉

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GB/T22959—2008

素和氟苯尼考标准储备液(4.8),移至100inL容量瓶中，用甲醇配成1卩g/mL的氯霉素、甲枫霉素和

氟苯尼考混合标准储备液。该溶液于一18°C保存。

4.101Mg/mL氟苯尼考胺标准储备液:准确吸取1.00mL氟苯尼考胺标准储备液(4.8)，移至100mL容

量瓶中，用甲醇配成1,ug/mL的氟苯尼考胺标准储备液。该溶液于一18"C保存。

4.1120ng/mL氯霉素、甲砚霉素和氟苯尼考混合标准中间液：准确吸取1.00mL混合标准储备液

(4.9),移至50mL容量瓶中，用水配成20ng/mL的氯霉素、甲矶霉素和氟苯尼考混合标准中间液。该

溶液于4°C保存。

4.1220ng/mL氟苯尼考胺标准中间液:准确吸取1.00mL氟苯尼考胺标准储备液(4.10),移至50mL

容量瓶中，用水配成20ng/mL的氟苯尼考胺标准中间液。该溶液于4C保存。

4.131Mg/mL内标标准储备液：准确吸取1.00卩L内标标准液(4.7),移至10mL容量瓶中，用甲醇

配成1Mg/mL内标标准储备液。该溶液于一18C保存。

4.1420ng/mL内标标准中间液：准确吸取1.00mL内标标准储备液(4.13),移至50mL容量瓶中，

用水配成20ng/mL的内标标准中间液。该溶液于4C保存。

4.15氯霉素、甲砚霉素和氟苯尼考混合基质标准工作溶液:根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，

临用时吸取一定量的混合标准中间液(4.11)和内标标准中间液(4.14),用空白基质溶液配成适当浓度

的混合基质标准工作液，每毫升该混合基质标准工作溶液含有0.15n氛代氯霉素(也-氯霉素)。

4.16氟苯尼考胺基质标准工作溶液:根据标准的灵敏度和仪器线性范围，临用吋吸取一定量的标准中

间液(4.12),用空白基质溶液配成适当浓度的氟苯尼考胺基质标准工作液。

4.17滤膜：0.2“m。

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.1m和0.01go

5.3离心机：转速$4000r/mino

5.4小型台式离心机：转速$13000r/mino

5.5组织捣碎机。

5.6匀浆机。

5.7减压旋转蒸发仪。

5.8超声波水浴。

5.9旋涡振荡器。

5.10聚丙烯离心管：带盖，50mL,1.5mL0

5.11鸡心瓶：25mLo

5.12具塞比色管：50mLo

6试样制备与保存

6.1试样的制备

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g,用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容

器，密封，并标明标记。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2试样的保存

将试样于一18C冰箱中保存。

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7测定步骤

7.1提取

称取5试样，精确至0.01g,置于50mL聚丙烯离心管中，加入内标标准中间液（4.14）75.0卩L,

加入25mL乙酸乙酯,0.75mL氨水（4.4）,3无水硫酸钠，匀浆提取30s,4000r/min离心5min,上

清液转移至50mL比色管中。另取一50mL离心管加入20mL乙酸乙酯，0.60mL氨水，洗涤匀浆刀

头10s,洗涤液移入第一支离心管中，用玻棒搅动残渣，旋涡振荡提取1min,超声波振荡提取5min,

4000r/min离心5min,上清液合并至50mL比色管，乙酸乙酯定容至50.0mL。摇匀后移取10.0mL

乙酸乙酯提取液于25mL鸡心瓶,45C减压旋转浓缩至干。

7.2净化

鸡心瓶中的残渣用2.00mL水溶解，旋涡振荡混匀，超声5min,加入3mL正己烷旋涡振荡混合

30s,静置分层，弃掉上层的正己烷，再加3mL正己烷旋涡振荡混合30s,静置分层，移取部分下层的水

相于1.5mL的聚丙烯离心管中，13000r/min离心5min,经0.2“m滤膜过滤后，供液相色谱-串联质

谱测定氯霉素、甲砚霉素和氟苯尼考。另吸取100滤液于液相进样瓶，加入400水，混匀，供液相

色谱-串联质谱测定氟苯尼考胺。

7.3空白基质溶液的制备

称取5空白样品，精确至0.01g,除不加入内标标准中间液,其他按7.1和7.2步骤操作。

7.4测定条件

7.4.1液相色谱参考条件

7.4.1.1氯霉素、甲硕I霉素和氟苯尼考测

a）色谱柱:SUPELCODiscoveryC18,5pm,150mmX2.1mm（内径）或相当者;

b）柱温：40C；

c）流动相：甲醇-水（2+3）；

d）流速：0.30mL/min；

e）进样量：20jiLo

7.4.1.2氟苯尼考胺测

a）色谱柱:IntersilCs-3,5pm,150mmX4.6mm（内径）或相当者；

b）柱温：40°C；

c）流动相：甲醇-水（4+1）；

d）流速：0.30mL/min；

e）进样量:10“L。

7.4.2质谱参考条件

a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b）扫描方式：负离子扫描（氯霉素、甲枫霉素和氟苯尼考测），正离子扫描（氟苯尼考胺测）；

c）检测方式：多反应选择离子检测（MRM）；

d）电喷雾电压（IS）：-4200V（氯霉素、甲砚霉素和氟苯尼考测），4500V（氟苯尼考胺测）；

e）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量

以使质谱灵敏度达到检测要求；

f）辅助气温度（TEM）：600C；

）定性离子对、定量离子对、采集吋间、去簇电压及碰撞能量见表10

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表1氯霉素、甲飒霉素、氟苯尼考、克代氯霉素（ds-氯霉素）和氟苯尼考胺的质谱参数

定性离子对定量离子对采集时间/去簇电压/碰撞能量/

化合物名称

G/n）（w/n）msVV

320.9/257.0-16

氯霉素320.9/152.020055

320.9/152.0-26

353.9/290.3-17

甲砚莓素353.9/185.220055

353.9/185.2-27

356.0/336.0-14

氟苯尼考356.0/336.0200—55

356.0/185.0