GB/T 22985-2008 牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22985—2008

牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、

环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、

二氟沙星和麻保沙星残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Determinationofenrofloxacin,danofloxacin,ciprofloxacin,sarafloxacin,

orbifloxacin,difloxacinandmarbofloxacininmilkandmilkpowder—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

GB/T22985—2008

刖

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人：陈瑞春、吕红英、段文仲、郭春海、艾连峰、邢军、马育松、姚春毅、庞国芳。

T

GB/T22985—2008

牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、

环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、

二氟沙星和麻保沙星残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保

沙星残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保

沙星残留量的测定和确证。

本标准的方法检出限：牛奶中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保

沙星均为1Mg/kg；奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星均

为4fzg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/TG379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1祁分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD)

3原理

用乙睛和磷酸盐缓冲溶液提取试样中残留的恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、

二氟沙星和麻保沙星，OasisHLB固相萃取柱"净化，5%氨水甲醇溶液洗脱，液相色谱-串联质谱测定,

外标法定。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2乙睛：色谱纯。

4.3磷酸：色谱纯。

4.4甲酸：色谱纯。

1)OasisHI.B固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

1

GB/T22985—2008

4.5磷酸氢二钠,N2HP()4•12H2Oo

4.6磷酸二氢钾,KH2P()4o

4.7氨水。

4.8磷酸盐缓冲溶液(0.05mol/L):称取5.68g磷酸氢二钠(4.5)和1.36g磷酸二氢钾(4.6),放入

1000mL烧杯中，加入800mL水溶解，用磷酸(4.3)调至pH=3.0,再用水定容至1000mLo

4.95%氨水甲醇溶液：吸取50皿1.氨水(4.7)与950mL甲醇(4.1)混合。

4.10甲酸溶液(pH=3.0)：量取500mL水，用甲酸(4.4)调pH值到3.0。

4.1125%甲醇溶液:量取250mL甲醇(4.1)用水稀释到1000mL。

4.12甲醇-甲酸溶液(15+85)：量取30mL甲醇(4.1)与170mL甲酸溶液(4.10)混合。

4.13标准物质：恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星、麻保沙星标准物质，纯

度大于等于95%。

4.14标准储备溶液：0.1mg/mLo准确称取适量的每种标准物质，用甲醇(4.1)配成0.1mg/mL的

标准储备溶液，该溶液在4C保存。

4.15混合标准中间溶液：1jug/mLo分别吸取1mL标准储备溶液(4.14)放入100mL容量瓶中，用

甲醇(4.1)定容至刻度。该溶液在4C保存。

4.16混合标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液配不同浓度的混合标准工作溶液，混合标准工

作溶液在4°C保存。

4.17OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg,3mL0使用前分别用5mL甲醇和5mL水和5mL磷

酸盐缓冲溶液(4.8)活化，保持柱体湿润。

4.18滤膜：0.2Mmo

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感0.1mg和0.01go

5.3涡旋振荡器。

5.4固相萃取装置。

5.5氮气吹干仪。

5.6真空泵：最大负压80kPo

5.7pH计:测量精度士0.02pH单位。

5.8贮液器：通过转接头连接于OasisHLB固相萃取柱上。

5.9离心机。

5.10旋转蒸发仪。

5.11具刻度离心管：10mLo

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。

6.2试样保存

牛奶置于4°C冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。

7测定步骤

7.1提取

7.1.1牛奶

称取2g试样，精确到0.01g,置于50mL具塞塑料离心管中，加入10mL乙睛，于涡旋振荡器振

2

GB/T22985—2008

荡提取1min,5000r/min离心5min,±清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液

（4.8）,10mL乙睛，重复以上步骤，合并上清液，于50C旋转蒸发，至乙月青全部蒸出。加入5mL磷酸

盐缓冲溶液,混匀。

7.1.2奶粉

称取0.5g试样，精确到0.01g,置于50mL具塞塑料离心管中，加入6mL磷酸盐缓冲溶液

（4.8），涡旋混匀，再加入10mL乙睛，于涡旋振荡器振荡提取1min,5000r/min离心5min,上清液过

滤到鸡心瓶中，在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液，10mL乙睛，重复以上步骤，合并上清液，于50C

旋转蒸发，至乙睛全部蒸出。加入5mL磷酸盐缓冲溶液,混匀。

7.2净化

将7.1的样液转移到贮液器中，再用5mL磷酸盐缓冲溶液洗鸡心瓶，洗液合并到贮液器，以约

1mL/min的流速全部过HLB固相萃取小柱（4.17）,待样液完全流出后，先后以4mL水、4mL25%甲

醇水溶液淋洗，抽干，用4mL5%氨水甲醇溶液（4.9）洗脱于10mL具刻度离心管中，洗脱液于50C,

氮气吹至约0.2mL吋停止浓缩，用甲醇-甲酸溶液（4.12）定容至1mL,5000r/min离心5min,过

0.2Mm滤膜,供液相色谱串联质谱分析。

7.3空白基质溶液的制备

将取牛奶阴性样品2g,奶粉阴性样品0.5g,按7.1和7.2操作。

7.4测定条件

7.4.1液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

）色谱柱：Go,5^m,150mmX2.1mm（内径）或相当者；

b）色谱柱温度：30°C；

c）进样：15卩L；

d）流动相梯度及流速见表1。

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间/min流速/(ptL/min)（）.1%乙酸水溶液/%甲醇/%

0.002008020

5.002004060

9.002004060

9.102008020

11.002008020

7.4.2质谱参考条件

质谱参考条件如下：

）离子化模式:电喷雾正离子模式（ESI+）；

b）质谱扫描方式：多反应监测（MRM）；

c）鞘气压力：104kP；

d）辅助气压力：138kP；

e）正离子模式电喷雾电压（IS）：4000V；

f）毛细管温度：32OC；

g）源内诱导解离电压：10V；

h）Q1,Q3分辨率：Q1为0.4,Q3为0.7；

i）碰撞气：高纯氮气；

J）碰撞气压力：0.2P；

3

GB/T22985—2008

k）其他质谱参数及7种嗟诺酮的CAS号、保留时间见表2。

表2七种隆诺酮类药物保留时间、C