GB/T 22987-2008 牛奶和奶粉中呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22987—2008

牛奶和奶粉中咲喃它酮、咲喃西林、

咲喃妥因和咲喃哩酮代谢物

残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

Determinationfortheresiduesoffuraltadon,nitrofurazone,

nitrofurantoinandfurazolidonemetabolitesinmilkandmilkpowder—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

发布

GB/T22987—2008

前言

本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：张进杰、曹亚平、刘晓茂、曹彦忠、王静淑、杨志伟、庞国芳。

T

GB/T22987—2008

牛奶和奶粉中咲喃它酮、咲喃西林、

咲喃妥因和咲喃哩酮代谢物

残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了牛奶和奶粉中咲喃它酮代谢物（5-吗咻甲基-3-氨基-2-噁醴烷基酮，英文缩写为

AMOZ）、咲喃西林代谢物（氨基脉，英文缩写为SEM）、吠喃妥因代谢物（1-氨基-2-内酰豚，英文缩写为

AHD）和咲喃醴酮代谢物（3-氨基-2-噁睦烷基酮，英文缩写为AOZ）残留量液相色谱-串联质谱测定

方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中AM（）Z、SEM、AHD和A（）Z残留量的测定。

本标准的方法检出限：牛奶中AMOZ.SEM.AHD和AOZ的检出限均为0.2Mg/kg；奶粉中

AMOZ、SEM、AHD和AOZ的检出限均为1.6Mg/kgo

注：本标准中咲喃它酮、咲喃西林、咲喃妥因和咲喃业酮及代谢物中英名称及英文缩写参见附录A中的表A.1。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义

（GB/T6379.1—2004ISO5725-1：1994,IDT）

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT）

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD）

3原理

牛奶或奶粉试样用三氯乙酸水解并脱蛋白，硝基咲喃类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生

化，用（）asisHLB或性能相当的固相萃取柱净化。液相色谱-串联质谱仪（ESI+）检。用内标法或外

标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯。

4.1水:GB/T6682,—级。

4.2甲醇:色谱纯。

4.3乙睛：色谱纯。

4.4乙酸乙酯：色谱纯。

4.5磷酸氢二钾，K2HP（）4o

4.6乙酸。

4.7二甲亚砚。

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GB/T22987—2008

4.8盐酸。

4.9三氯乙酸，C2HCL02o

4.10氢氧化钠。

4.112-硝基苯甲醛(2-NP),GH5NO：:含量$99%。

4.120.1mol/L磷酸氢二钾溶液:称取17.4g磷酸氢二钾(4.5)用水溶解，定容至1000mL。

4.130.2mol/L盐酸：量取17mL浓盐酸(4.8)用水定容至1000mLo

4.144mol/L氢氧化钠溶液:称取80g氢氧化钠(4.10)用水溶解，定容至500mLo

4.150.5mol/L三氯乙酸溶液：称取37.5g三氯乙酸(4.9)用水溶解，定容至500mLo

4.16衍生剂：含2-硝基苯甲醛0.05mol/L。称取0.075g2-硝基苯甲醛(4.11)溶于10mL二甲亚砚

(4.7),现用现配。

4.17样品定容溶液：取10mL乙睛(4.3),0.3mL乙酸(4.6)用水稀释到100mLc.

4.18标准物质：AMOZ(CAS：43056-63-9).SEM(CAS：563-41-7)、AHD(CAS：2827-56-7)和AOZ

(CAS：80-65-9)纯度均$99%。

4.19同位素标记物标准物质：D5-AMOZ,HC15N-SEMJ1C3-AHD和D』-A()Z。四种内标标准物质的

纯度均$99%。

4.201.0mg/mL标准储备溶液:分别称取适量的四种硝基咲喃代谢物标准物质(4.18),分别用甲醇

稀释成1.0mg/mL的标准储备溶液。避光保存于一18C冰柜中。

4.210.1Mg/mL混合标准溶液:分别吸取适量四种硝基咲喃代谢物的标准储备溶液(4.20)用甲醇

稀释成0.1.ug/mL的混合标准溶液，避光保存于一18€冰柜中。

4.221.0mg/mL同位素标记物混合内标储备溶液:分别称取适量的四种硝基咲喃代谢物的同位素标

记物标准物质(4.19)分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。避光保存于一18C冰柜中。

4.230.1Mg/mL同位素标记物混合内标溶液:分别移取适量的四种硝基咲喃代谢物的同位素标记物

内标储备溶液(4.22)用甲醇稀释成0.1Mg/mL的混合内标标准溶液，避光保存于一18C冰柜中。

4.24OasisHLB固相萃取柱“或相当者：60mg3mL0使用前依次用5mL甲醇和10mL水预处理，

保持柱体湿润。

4.25滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3液体混匀器。

5.4固相萃取装置。

5.5氮气吹干仪。

5.6恒温振荡水浴。

5.7真空泵：真空度应达到80kPa。

5.8微量注射器：25mL,100mLo

5.9棕色具塞离心管：25mL,50mLo

5.10pH计:测量精度土0.02pH单位。

5.11贮液器：50mLo

DOasisHI.B固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

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GB/T22987—2008

5.12高速离心机：转速10000r/min以上。

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

实验室样品混合均匀，分出0.5kg作为试样。

6.2试样保存

试样置于一18C冰柜，避光保存。

7测定步骤

7.1待测样品溶液的制备

7.1.1牛奶样品脱蛋白、水解和衍生化

称取牛奶样品8g（精确到0.01g）置于50mL棕色离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液（4.15）。

向上述离心管中加入0.2mL衍生剂（4.16）,再加入适量混合内标溶液（4.23）使四种硝基咲喃代谢物

内标物最终定容浓度均为2.0ng/mLo用液体混匀器混匀，置于37°C恒温振荡水浴中避光反应16h。

离心管取出后放置至室温，在10000r/min下离心10min.±清液倒入另一棕色离心管中。

7.1.2奶粉样品脱蛋白、水解和衍生化

称取奶粉样品1g（精确到0.01g）置于50mL棕色离心管中，加入8mL水，涡旋混合后，再加入

15mL三氯乙酸溶液（4.15）0向上述离心管中加入0.2mL衍生剂（4.16）,再加入适量混合内标溶液

（4.23）使四种硝基咲喃代谢物内标物最终定容浓度均为2.0ng/mLo用液体混匀器混匀，置于37C

恒温振荡水浴中避光反应16h。离心管取出后放置至室温，在10000r/min下离心10min上清液倒

入另一棕色离心管中。

7.1.3样品溶液净化

卜.述衍生溶液加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（4.12）,用4mol/L氢氧化钠溶液（4.14）调节

溶液pH约为7.4,在10000r/min下离心10min上清液倒入下接OasisHLB固相萃取柱（4.24）的贮

液器中，在固相萃取装置上使样液以小于2mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱（4.24）,待样液

全部通过固相萃取柱后用20mL20%甲