T/GDFDTAEC 08-2024 食品中禁用脂溶性合成色素的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

CCSC53

TB

广东省食品药品审评认证技术协会团体标准

T/GDFDTAEC08—2024

食品中禁用脂溶性合成色素的测定

液相色谱-串联质谱法

Determinationofprohibitedfat-solublesyntheticcolourinfoods

byliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethod

2024-03-29发布2024-03-29实施

广东省食品药品评审认证技术协会  发布

T/GDFDTAEC08—2024

目次

前言..................................................................................II

1范围.................................................................................1

2规范性引用文件.......................................................................1

3术语和定义...........................................................................1

4方法原理.............................................................................1

5试剂和材料...........................................................................1

6仪器和设备...........................................................................2

7分析步骤.............................................................................2

8结果计算和表述.......................................................................4

9精密度...............................................................................4

10其他................................................................................4

附录A（资料性）禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间.5

附录B（资料性）禁用脂溶性合成色素的中英文名称、CAS号和化学分子式...................6

附录C（资料性）禁用脂溶性合成色素定量离子提取流图...................................7

I

T/GDFDTAEC08—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由广州市食品检验所、广州汇标检测技术中心提出。

本文件由广东省食品药品评审认证技术协会归口。

本文件起草单位：广州市食品检验所、广州汇标检测技术中心、华测检测认证集团股份有限公司、

广州检验检测认证集团有限公司。

本文件主要起草人：毛新武、周庆琼、杨群华、梁友、陈若璇、戚平、林子豪、何婉琪、邱险辉、

吴滋灵、叶丹、许汇成、徐政慧、张竞雯。

II

T/GDFDTAEC08—2024

食品中禁用脂溶性合成色素的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了食品中禁用脂溶性合成色素（见附录A）的液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于辣椒粉、调味酱、豆制品、熟肉制品、鲜蛋等食品中32种禁用脂溶性合成色素的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T33087仪器分析用高纯水规格及试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经1%乙酸乙腈溶液提取，C18分散萃取小管净化后，利用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法或

外标法定量。

5试剂和材料

除另有说明，本实验使用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水或GB/T33087中规定的

高纯水。

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。

5.1.3乙酸（CH3COOH）：质谱纯。

5.1.4三氯甲烷（CHCl3）。

5.1.5十八烷基硅烷键合硅胶（C18材料）：粒径40μm～60μm。

5.1.61%乙酸乙腈溶液：移取1mL乙酸于100mL容量瓶中，用乙腈定容到刻度。

5.2标准品

32种脂溶性合成色素及4种苏丹红内标标准品：参见附录B，纯度≥95%。

5.3标准溶液配制

5.3.1标准储备溶液（1000mg/L）：分别准确称取经折算相当于50mg（精确到0.1mg）的色素标准

品，用三氯甲烷或乙腈溶解后，转移至50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下避光保存，

保存期6个月。

5.3.2混合标准储备溶液A组（1mg/L）：根据附录A化合物的浓度分组，准确移取0.1mL的A组

色素标准储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3个月。

5.3.3混合标准储备溶液B组（10mg/L）：根据附录A化合物的浓度分组，准确移取1mL的B组

1

T/GDFDTAEC08—2024

色素单标储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3个月。

5.3.4内标储备液（1000mg/L）：分别准确称取经折算相当于50mg（精确到0.1mg）的内标标准品，

置50mL容量瓶中，用三氯甲烷或乙腈溶解后，甲醇定容到刻度。在—18℃下避光保存，保存期6个

月。

5.3.5混合内标储备液（10mg/L）：分别准确移取1mL的内标储备溶液于100mL容量瓶中，用甲

醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3个月。

5.3.6混合标准中间液A组（0.1mg/L）：准确吸取1mL的混合标准储备溶液A组于10mL容量瓶

中，用甲醇定容到刻度。临用现配。

5.3.7混合标准中间液B组（1.0mg/L）：准确吸取1mL的混合标准储备溶液B组于10mL容量瓶

中，用甲醇定容到刻度。临用现配。

5.3.8混合内标中间液（0.01mg/L）：准确吸取一定量的混合内标储备溶液，用甲醇稀释、定容至刻

度。临用现配。

5.3.9混合标准工作液：根据需要，用甲醇将混合标准中间液和混合内标中间稀释成所需的标准工作

溶液。

5.4材料

5.4.1十八烷基硅烷键合硅胶（C18材料）：粒径40μm～60μm。

5.4.2疏水聚四氟乙烯微孔滤膜：0.22μm。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾电离源（ESI）。

6.2分析天平：感量为0.1mg、0.01g。

6.3离心机：转速不低于8000r/min。

6.4超声波清洗器。

6.5匀浆机。

6.6食物粉碎机。

7分析步骤

7.1试样制备

辣椒粉、调味酱混合均匀，豆制品、熟肉制品用食物粉碎机搅碎混匀，鲜蛋煮熟后取蛋黄用食物粉

碎机搅碎混匀，制备好的试样密封冷藏避光保存，备用。

7.2试样提取

称取2g（准确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入混合内标储备液0.05mL，加入10mL的1%乙

酸乙腈溶液，超声5min，在8000r/min下离心5min，重复提取一遍，合并上清液。取1mL上清液，用

甲醇定容至5mL。准确移取2mL提取液至含有50mgC18材料的净化管中，涡旋1min，在8000r/min下

离心5min，上清液过0.22μm滤膜，待测。

每个样品做2个平行测试，同时做空白测试。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a)色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm，或同等性能的色谱柱；

b)流动相：A为0.1%乙酸水溶液，B为0.1%乙酸甲醇溶液；梯度洗脱条件见表1；

c)柱温：40℃；

d)进样量：2μL；

e)流速：0.3mL/min。

表1液相色谱梯度洗脱条件

2

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时间，min流动相A，%流动相B，%

0.008020

0.508020

5.002085

6.00595

10.00595

10.108020

15.008020

7.3.2质谱参考条件

a)离子源类型：电喷雾电离源（ESI）；

b)扫描方式：正离子电离模式；

c)电喷雾电压：2.5kV；

d)离子源温度：150℃；

e)脱溶剂气温度：500℃；

f)脱溶剂气流速：1000L/h；

g)锥孔气流速：150L/h；

h)定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞电压参见附录A。

7.4试样溶液的测定

7.4.1定性分析

在同样测试条件下，试样溶液中脂溶性合成色素的保留时间与标准溶液相应峰的保留时间相对偏差

在±25%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的标准溶液相对离子丰度一致。其允许偏差

应符合表2的要求。

表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

单位为百分号

相对离子丰度允许偏差

＞50±20

20～50±25

10～20±30

≤10±50

7.4.2定量测定

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以目标化合物特征离子质量色谱峰面积外标法

定量，或以目标化合物与内标物特征离子峰面积比值内标法定量。标准工作液及试样溶液中的脂溶性合

成色素响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，标准溶液特征离子质量色谱图见

附录B。

苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV分别以其对应内标物采用内标法定量，其余化合物以外标法定量。

注：

7.5空白试验

除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行测定。

3

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8结果计算和表述

8.1外标法

试样中各色素含量按式（1）计算：

·····················································(1)

�s��

式中：�=�×�s×1000

X——样品中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

CS——标准溶液中被测组分质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

A——样品溶液中被测组分峰面积；

V——样品定容体积，单位为毫升（mL）；

m——样品质量，单位为克（g）；

AS——标准溶液中被测组分峰面积；

1000——换算系数。

8.2内标法

试样中各色素含量按式（2）计算：

·····················································(2)

�s��

式中：�=�×�s×1000

X——样品中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

CS——标准溶液中被测组分质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

R——样品溶液中被测组分与相应内标物峰面积比值；

V——样品定容体积，单位为毫升（mL）；

m——样品质量，单位为克（g）；

RS——标准溶液中被测组分与相应内标物峰面积比值；

1000——换算系数。

计算结果保留位有效数字。

2

注：苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV分别以其对应内标物采用内标法定量，其余化合物以外标法定量。

9精密度

其他在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

10其他

本方法中，当样品取样量为2g，定容体积为5mL时，32种禁用脂溶性合成色素的检出限为0.05mg/kg

（A组化合物）、0.50mg/kg（B组化合物）。

4

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A

A

附录A

（资料性）

禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间

禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间，见表A.1。

表A.1禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间

标准溶液浓母离子定量离子定性离子去簇电压定量离子碰定性离子碰保留时间

序号中文名称

度分组(m/z)(m/z)(m/z)(V)撞电压(V)撞电压(V)(min)

1碱性嫩黄OA组268.2147.2122.23028254.24

2碱性蓝1A组363.4347.3311.13036434.68

3碱性蓝41A组371.1164.1133.13019354.22

4碱性蓝7A组478.3434.5390.43046605.91

5碱性绿1A组385.4341.2297.33036485.36

6碱性绿4A组329.3313.3208.23036364.68

7碱性橙21A组315.3300.2285.23023304.35

8碱性橙22A组391.3376.2361.43028364.88

9碱性红46A组321.2224.1196.03011163.98

10碱性红5B组253.3237.7209.23035353.8

11碱性红9A组288.1195.2151.23033533.32

12碱性紫2A组330.4223.1208.13031414.2

13碱性黄24A组322.4160.1136.13020254.35

14碱性黄51A组292.2160.1106.13020254.20

15结晶紫A组372.3356.2340.33038505.13

16二乙基黄A组254.3134.277.03025257.08

17分散蓝124A组378.3220.386.93018326.44

18分散橙11A组238.177.1165.13057326.13

19分散红11A组269.2254.2226.13025325.18

20分散红9A组238.3223.3220.33025196.6