GB/T 31803-2015 棉花皱叶病毒检疫鉴定方法

JCS65.020.01

n16GB

中华人民共和国国家标准

GB/T31803-2015

棉花皱叶病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofCottonleafcrumplevirus

2015-07”03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局

发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T31803-2015

目。吕

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

惰性意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

水标准IR企罔植物检疫标准化技术委bl会＜SAC/TC271)提山并归口。

小；标准起草单位：巾间检验栓疫科学研究院、中华人民共和罔棉建111人搅检验检疫局、浙江大学、浙

江山入境检验检疫局。

本标准主要起草人：张永江、需荣、沈建国、周雪平、鲁沽、张明哲、李桂芬、朱7j(芳。

GB/T31803-2015

棉花皱叶病毒检疫鉴定方法

1范围

本1号航规定了棉花椒ut州市：的免疫学及分子生物学检疫鉴定等方法。

本标准适蚓于可能愣带棉花皱叶的毒的币体寄主植物叶片组织的检疫鉴定。

2仪器设备、用具和试剂

2.1仪器设备

电子分析天平（0.001g）、小型离心机、台式冷冻离心机、恒温水陆锅、酶标仪、普通PCR仪、实时荧

光PCR仪、电泳系统、pH计、凝胶成像系统、4℃冰箱、超净工作台、－80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、

制冰机、？品旋振荡器、敬、波炉等。

2.2用具

可调移液器（2.5p.L、10ttL、201;.L、100µL、1000ttL）、吸头、离心管、Eppendorf管（0.2mL、

0.5mL、1.5mU和研钵等。

2.3试剂

l徐有特殊说明外．所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂．

DAS-ELISA、常规PCR及实时荧光PCR检测试剂分别见附录8、附录C及附录D。

3检疫鉴定方法

3.1DAS-ELlSA检测

DAS-ELISA检测见附录B.

3.2常规PCR检测

常规PCR检测见附录C。

3.3实时荧光PCR检测

实时荧光PCR检测见附录D。

4结果判断

3.1、3.2l生3.3巾两种不同原理的检测方法的结果为阳性，即可判定样品为CLCrV阳性。一般足－

DAS-ELISA检测为阳性后，常规PCR或实时荧光PCR检测结果为阳性即句判断样品为CLCrV阳性。

CB/T31803一2015

5样品保存与记录结果

5.1样品保存

结果判定为阳性的样品应妥善保存，并做好登记和标记．以备复核用。保存期满后，需经灭活处理。

5.2结果记录

完整的实验记坎贝包捐：样品的米板、种类、时间，：；U命中敌视lj时间、地点、方法和｜结果．并有实验人员

的签字；DAS-ELISA检测锦有酶联反应原始数据.PCJ~枪ij!lj需有电泳结果｜刽片．实时荧光PCI<检测l铺

有扩增H↓l线结果图片。

2

GB/T31803-2015

附录A

〈资料性附录〉

棉花皱叶病毒背景资料

A.1背景资料

A.1.1棉花皱叶病毒基本信息

中文名：棉花皱叫病毒。

学名：Collonleu/crumpievirus。

缩写：CLCrV。

分类地位：双件：病毒科（（；eminiviridae）菜豆金色花Ill•病毒阴（8ego111ovirus）。

传播途径：炯粉虱（Be111isiatabaci）及茵木嫁接传播．机械接触、荒地子（Cuscuta』ubinc/us川、种子

及花粉不传播。

A.1.2方法原理

根据棉花皱叶病根与抗体之间的特异性反应．对样if!，进行双抗体夹心酶联免疫l监附＜DAS-ELISA)

检测；根据该病毒DNA保守厌的特异性进行常规PCH或实fl｛荧光PCR检测．通过电泳条偌大小或指．

的HJ·I线的变化进行结果判定．

A.2寄主范围

包括棉j禹＜Go.守．ρiw川〉、阿麻属＜Al』ulilοII）、捕辛各．属（Al1'1aea）、才♀槛属（Hibiscus）、锦葵！高（MahκI.）、架百i

树Ji[.,(Castwm.、ρermu111）、大豆h唱（Glycine）、来豆hJ!.(Plia:wolus）及县菜）tJ!.(Vicia）的d些梢物．

A.3分布

该病毒主要分布在印度、愚两哥、美同、危地马拉丘中东地区。

A.4病害症状

该病毒侵染棉花造成日1·中脉组织增尘、叶脉坏死或脉1y~，日｜协主组织的11-j-肉