DB22/T 2050-2014 动物源性饲料中猪源性成分测定 实时荧光PCR方法

ICS65.120

B46

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2050—2014

动物源性饲料中猪源性成分测定

实时荧光PCR方法

Determinationofporcinederivedmaterialsinanimal-originatedfeedstuffs

Real-timePCRmethod

2014-02-28发布2014-04-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2050—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华

人民共和国吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、华蕾、王潇、亓晓艳、王颖、冷喜芳、吴桐、陈颖。

I

DB22/T2050—2014

动物源性饲料中猪源性成分测定实时荧光PCR方法

1范围

本标准规定了动物源性饲料中猪源性成分的实时荧光PCR检验方法，该方法的检出限为0.1%。

本标准适用于动物源性饲料中猪源性成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猪源性成分porcine-derivedmaterials

猪种属特异性DNA片段。

3.2

实时荧光PCRrealtimePCR

实时荧光聚合酶链式反应。

3.3

Ct值cyclethresholdvalue

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4原理

对样品进行DNA提取，通过实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅曲线，检测饲料中猪源性

成分。

5试剂

除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA

酶污染的容器分装。

1

DB22/T2050—2014

5.1引物和探针

a)上游引物：5’-CATGCGTATCACCACCATTATATC-3’

b)下游引物：5’-TGCCAAGCGGGTTGCT-3’

c)探针：FAM-CGAGCTTAACTACCATGCCGCGTGA–TAMRA

5.2TaqDNA聚合酶。

5.3dNTP：dATP（deoxyadenosinetriphosphate，脱氧腺苷三磷酸）、dGTP（deoxycytidinetriphosphate，

脱氧鸟苷三磷酸）、dCTP（deoxycytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸）、dTTP（deoxythymidine

triphosphate，脱氧胸苷三磷酸）。

5.4动物基因组DNA提取纯化试剂盒。

5.5RNaseA酶：冻干品，不含DNase。

5.6蛋白酶K：冻干品。

5.775%乙醇、异丙醇、三氯