HY/T 153-2013 海水、沉积物中致突变性的测定 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验

;

ICS07.06013.060

Z17

中华人民共和国海洋行业标准

/—

HYT1532013

、

海水沉积物中致突变性的测定

/

鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验

ㅤㅤㅤㅤ

DetectionofmutaenecitinseawaterandsedimentsamlebSalmonella

gypy

/()

thimuriummammalsmicrosomalenzmetestAmestest

ypy

2013-04-25发布2013-05-01实施

国家海洋局发布

/—

HYT1532013

目次

前言…………………………Ⅲ

1范围………………………1

2规范性引用文件…………………………1

3术语和定义………………1

4方法原理…………………1

5仪器设备…………………1

6试剂和材料………………2

、

7菌株选择鉴定和保存……………………2

8样品采集和保存…………………………3

9分析步骤…………………4

10结果判定…………………5

11结果计算…………………5

()

附录A规范性附录菌株生物学特性鉴定标准及标准诊断性诱变剂………………6

参考文献………………………8

ㅤㅤㅤㅤ

表A.1菌株生物学特性鉴定标准结果…………………6

表A.2标准诱变剂测定结果及表示方法………………6

表A.3推荐用标准诱变剂………………7

Ⅰ

/—

HYT1532013

、

海水沉积物中致突变性的测定

/

鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验

1范围

、、、、

本标准规定了海水和沉积物中致突变性测定所需的样品采集处理试验分析计算等的技术

要求。

本标准适用于海水和沉积物的致突变性的测定。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

—/

GB15193.42003鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验

:

海洋监测规范第部分沉积物分析

GB17378.55

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

回复突变reversemutation

细菌在化学突变物作用下由营养缺陷型回变到野生型。

3.2

鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验Salmonellathimuriumreversemutationtest

yp

利用一组鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型试验菌株测定引起沙门氏菌碱基对置换或移码突变的化学物

质所诱发的组氨酸缺陷型回复突变到野生型的试验方法。

4方法原理

(),

人工诱变鼠伤寒沙门氏菌的突变型即组氨酸缺陷型菌株在无组氨酸的培养基上不能生长在有

。,

组氨酸的培养基上可以正常生长但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时则沙门氏菌突变型

(),,,

可回复突变为野生型表现型因而在无组氨酸培养基上也能生长故可根据菌落形成数量检查受试

。,

物是否为致突变物某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变型产生回复突变代谢活化系

()()。/

统可以用多氯联苯PCB诱导的大鼠肝匀浆S-9制备的S-9混合液使用鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物

微粒体酶试验检测海水或沉积物的致突变性。

5仪器设备

本试验应包括以下仪器设备:

1

/—

HYT1532013

):,/;

a低温高速离心机温度4℃转速12000rmin

):,;

b超低温冰箱-80℃或液氮罐

)洁净工作台;

c

)恒温震荡培养箱:;

d37℃±1℃

)恒温水浴锅:;

e40℃±1℃

)蒸汽压力锅:;

f121℃±1℃

g)K-D浓缩器;

h)匀浆器;

)氮吹仪;

i

)蒸馏回流装置;

j

)、:;

k聚乙烯聚四氟乙烯或其他惰性材质密闭容器25L

)采泥器;

l

):;

m培养皿直径90mm

n)其他实验室常用设备。

6试剂和材料

、、、、、

营养肉汤培养基营养肉汤琼脂培养基底层培养基顶层培养基0.8%氨苄青霉素溶液0.1%结

晶紫溶液、组氨酸溶液、/生物素溶液、、、

L-0.5mmolLD-0.8%四环素溶液氨苄青霉素平板培养基氨苄

、、()()、

青霉素四环素平板培养基组氨酸生物素平板培养基二甲基亚砜光谱纯辅助因子

--DMSOS-9

()、、(ㅤㅤㅤㅤ)—中第章的

混合液试剂10%S-9混合液活化系统或混合液的制备按4

S-9S-9GB15193.42003

要求执行。

,,,。

除非另作说明所用试剂均为分析纯培养基成分无诱变性水为蒸馏水或等效纯水所用试剂应

避免高温处理。

、

7菌株选择鉴定和保存

7.1菌株选择

采用两株鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株、。可检测各种移码型诱变剂;可

TA98TA100TA98TA100

检测引起碱基对置换的诱变剂。

7.2菌株鉴定

7.2.1菌株鉴定要求

/()。

菌株特性应与鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验标准相符见附录中表突变型菌

AA.1

,:

的某些特性易丢失或变异遇到下列情况应鉴定菌株的基因型

)在收到培养菌株后;

a

b)当制备一套新的冷冻保存株或冰冻干燥菌株时;

)当每皿自发回复突变菌落数超出表所规定的正常范围时;

cA.1

d)当对标准诱变剂丧失敏感性时;

)使用主平板传代时;

e

)投入使用前。

f

2