GB 15193.4-2003 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验

ICS07.100

C53

中华人民共和国国家标准

GB15193.4-2003

代替GB15193.4-1994

鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物

微粒体酶试验

Salmonellatyphimurium/mammalsmicrosomal

enzymetest(Amestest)

2003-09-24发布2004-05-01实施

华人民共和国卫生部发布

国国家标准化管理委员会

GB15193.4-2003

月g吕

本标准全文强制。

本标准代替GB15193.4-1994((鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验》。

本标准与GB15193.4-1994相比主要修改如下:

a)在“范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能

对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新

资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、

农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;增加本标准的不适用范围;

b>增加对照组的设置;

c)在“培养基制备及试剂的配制”中:将

-1.5%琼脂培养基的配制方法中将“加蒸馏水400ml,”改为“加蒸馏水至400mL";

—0.5mmol/L组氨酸一生物素溶液(诱变试验用)配制方法中的L-组氨酸加人量由

"17.4mg'，改为“19.5mg";

—顶层培养基制备方法中每100mL顶层琼脂中“加10mL10.5mol/L'，改为“加10mL

0.5mmol/1_";

—将L-组氨酸溶液和0.5mol/LD-生物素溶液(鉴定菌株用)中的“0.5mol/L'，改为

"0.5mmol/L"，其后面内容中的“0.5mol/L生物素”的浓度均改为“0.5mmol/L".

d)将原标准"，7受试物剂量、溶剂和特殊处理”标题改为“试验设计及受试物的特殊处理”，并增

加对照组设置内容;

e)删除A“mes试验报告”的内容。

本标准的附录A为规范性附录。

自本标准实施之日起，GB15193.4-1994同时废止

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、北京医科大学、浙江医科大学。

本标准主要起草人:戴寅、丁兰、金钟初、郭世萍。

本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。

GB15193.4-2003

鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验

范围

本标准规定了Ame，试验的基本技术要求

本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、

生物和物理因素的致突变作用，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资

源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工

业用微生物等。

本标准不适用于具有杀菌和/或抑菌作用的受试物，不适用于具有妨碍哺乳动物细胞复制系统的受

试物。

2原理

鼠伤寒沙门氏菌的突变型(即组氨酸缺陷型)菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸的

培养基上可以正常生长但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌突变型可回复突

变为野生型(表现型)，因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落形成数量，检查受试物是否为

致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变型产生回复突变，代谢活化系统可以用

多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆(S-9)制备的S-9混合液

3仪器

3.1实验室常用设备。

3.2低温高速离心机，低温冰箱(-800C)或液氮罐，洁净工作台，恒温培养箱，恒温水浴，蒸气压力锅

匀浆器等

4试剂

培养基成分或试剂除说明外至少应是化学纯，无诱变性。避免重复高温处理，选择适当保存温度和

期限，如肉汤保存于4℃不超过六个月，其他详见下述各培养基及溶液说明。

4.1营养肉汤培养基

牛肉膏2.59

胰陈(或混合蛋白陈)5.0g

氯化钠2.59

磷酸氢二钾(K,HPO,·3H,O)1.3g

蒸馏水500ml

加热溶解，调pH至7.4，分装后。.103MPa20min灭菌，普通冰箱保存备用，保存期不超过半年。

4.2营养肉汤琼脂培养基

用作

a)基因型鉴定的结晶紫敏感试验，抗氨节青霉素和四环素试验，紫外线敏感性试验。

b)细菌活力鉴定。

琼脂粉1.59

营养肉汤培养基100ml-

加热融化后调pH为7.4,0.103MPa20min灭菌

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GB15193.4-2003

4.3底层培养基所需试剂及配制

4.3.1磷酸盐贮备液

磷酸氢钠按(NaNH,HPO,·4H70)17.5g

柠檬酸(CHa07·HiO)10.0g

磷酸氢二钾(K2HPOO50.0g

硫酸镁，‘(MgS04·7H,O)1.0g

加蒸馏水至100mL,0.103MPa20min灭菌。

4.3.240%葡萄糖溶液

葡萄糖40.0g

加蒸馏水至100mL,O.055MPa20min灭菌。

4.3.31.5%琼脂培养基

琼脂粉6.0g

加蒸馏水至400mL

融化后0.103MPa20min灭菌。

4.3.4底层培养基(无菌操作)

趁热((800C)，在灭菌琼脂培养基中(400mL)依次加人:

磷酸盐贮备液8mL

40%葡萄糖溶液20mL

充分混匀，待凉至80℃左右时倒平皿，每皿(090mm)25mL,370C培养过夜以除去水分及检查有无

污染。

4.4顶层培养基的成分及制备

4.4.1顶层琼脂

琼脂粉3.0g

氯化钠2.5g

加蒸馏水至500mL

4.4.20.5mmol/L组氮酸一生物素溶液(诱变试验用)

D-生物素(分子量244)30.5mg

L一组氨酸(分子量155)19.5mg

加蒸馏水至250mL,

4.4.3顶层培养基制备

加热融化顶层琼脂，每100mL顶层琼脂中加10mL0.5mmol/L组氨酸一生物素溶液。混匀，分装

在100ml一三角瓶中，0.103MPa20min灭菌。用时融化分装小试管，每管2mL，在45℃水浴中保温。

4.5特殊试荆和培养基的配制

4.5.10.8%氨节青霉素溶液(鉴定菌株用，无菌配制):称取氨节青霉素40mg，用。.02mol/L氢氧化

钠溶液稀释至5mL，保存于冰箱。

4.5.20.1%结晶紫溶液(鉴定菌株用):称取100mg结晶紫，溶于100mL无菌水。

4.5.3L-组氨酸溶液和0.5mmol/LD-生物素溶液(鉴定菌株用):称取L一组氨酸。.4043g和D-生物

素12.2mg，分别溶于100ml-蒸馏水，0.103MPa20min灭菌，保存于4℃冰箱

4.5.40.8%四环素溶液(用于四环素抗性试验和氨节青霉素一四环素平板):称取40mg四环素，用

0.02mol/L盐酸缓冲液稀释至5mL，保存于4℃冰箱。

1)待其他试剂完全溶解后再将硫酸镁缓慢放人其中继续溶解，否则易析出沉淀。

Gs15193.4-2003

4.5.5氨节青霉素平板(用作TA97,TA98,TA100菌株的主平板)和氨节青霉素一四环素平板(用作

TA102菌株的主平板)，每1000mL中由以下成分组成:

底层培养基910mL

磷酸盐储备液20mL

40葡萄糖溶液50mL

组氨酸水溶液(0.4043g/100mL)10mL

0.5mmol/L生物素6mL

0.8%氨节青霉素溶液3.15mL

0.8%四环素溶液0.25mL

四环素仅在使