GB 15193.23-2014 食品安全国家标准 体外哺乳类细胞染色体畸变试验

中华人民共和国国家标准

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犌犅１５１９３．２３２０１４

食品安全国家标准

体外哺乳类细胞染色体畸变试验

（报批稿）

２０１４１２０１发布２０１５０５０１实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

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犌犅１５１９３．２３２０１４

食品安全国家标准

体外哺乳类细胞染色体畸变试验

１范围

本标准规定了体外哺乳类细胞染色体畸变试验的基本试验方法和技术要求。

本标准适用于评价受试物的体外哺乳类细胞染色体畸变。

２术语和定义

２．１染色体结构畸变

通过显微镜可以直接观察到的发生在细胞有丝分裂中期的染色体结构变化。如染色体中间缺失和

断片、染色体互换等。染色体结构畸变可分为染色体型畸变（）和染色单体

ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｔｅａｂｅｒｒａｔｉｏｎ

ｙｐ

型畸变（）。

ｃｈｒｏｍａｔｉｄｔｅａｂｅｒｒａｔｉｏｎ

ｙｐ

２．１．１染色体型畸变

染色体结构损伤，表现为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组等改变。

２．１．２染色单体型畸变

染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组等改变。

２．２有丝分裂指数

中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值；是反映细胞增殖程度的指标。

２．３核内复制

在复制的期之后，细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个期的过程。其结果是染色体

ＤＮＡＳＳ

有、、…倍的染色单体。

４８１６

２．４裂隙

染色体或染色单体损伤的长度小于一个染色单体的宽度，为染色单体的最小错误排列。

３试验目的和原理

通过检测受试物是否诱发体外培养的哺乳类细胞染色体畸变，评价受试物致突变的可能性。在加

入或不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳类细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋

水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞、制片、染色、分析染色体畸变。

４仪器和试剂

４．１仪器

细胞培养箱，倒置显微镜，超净台，离心机。

１

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４．２培养液

常用’培养液（，），也可选用其他合适培养液。加入

ＥａｌｅｓＭＥＭｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍＭＥＭ

ｇ

抗菌素（青霉素按／、链霉素／），将灭活的胎牛血清或小牛血清按的比例加入

１００ＩＵｍＬ１００ｍＬ１０％

μｇ

培养液。

４．３代谢活化系统

４．３．１犛９辅助因子的配制

４．３．１．１镁钾溶液

氯化镁１．９ｇ和氯化钾６．１５ｇ加蒸馏水溶解至１００ｍＬ。

／磷酸盐缓冲液（）

４．３．１．２０．２犿狅犾犔犎７．４

狆

磷酸氢二钠（，／），磷酸二氢钠（·，／），调

ＮａＨＰＯ２８．４Ｌ４４０ｍＬＮａＨＰＯＨＯ２７．６Ｌ６０ｍＬＨ

２４ｇ２４２ｇｐ

至，灭菌或滤菌。

７．４０．１０３ＭＰａ２０ｍｉｎ

辅酶（氧化型）溶液

４．３．１．３Ⅱ

无菌条件下称取辅酶，用无菌蒸馏水溶解配制成／溶液，现用现配。

Ⅱ０．０２５ｍｏｌＬ

葡萄糖磷酸钠盐溶液

４．３．１．４６

称取葡萄糖磷酸钠盐，用蒸馏水溶解配制成／，过滤灭菌。现用现配。

６０．０５ｍｏｌＬ

大鼠肝组分的诱导和配制

４．３．２犛９

选健康雄性成年或大鼠，体重，约周龄周龄。将多氯联苯

ＳＤＷｉｓｔａｒ１５０ｇ～２００ｇ５～６

（）溶于玉米油中，浓度为／，按／体重无菌操作一次腹腔注射，后处死

Ａｒｏｃｌｏｒ１２５４２００Ｌ５００ｍｋ５ｄ

ｇｇｇ

动物，处死前禁食１２ｈ。

也可采用苯巴比妥钠和萘黄酮联合诱导的方法进行制备，经口灌胃给予大鼠苯巴比妥钠和萘

ββ

黄酮，剂量均为／体重，连续，禁食后断头处死动物。其他操作同多氯联苯诱导。

８０ｍｋ３ｄ１６ｈ

ｇｇ

处死动物后取出肝脏，称重后用新鲜冰冷的／氯化钾溶液连续冲洗肝脏数次，以便除去能抑

０．１５ｍｏｌＬ

制微粒体酶活性的血红蛋白。每克肝（湿重）加／氯化钾溶液，连同烧杯移入冰浴中，用消毒

０．１ｍｏｌＬ３ｍＬ

剪刀剪碎肝脏，在玻璃匀浆器（低于／，）或组织匀浆器（低于／，）

４０００ｒｍｉｎ１ｍｉｎ２ｍｉｎ２００００ｒｍｉｎ１ｍｉｎ

～

中制成肝匀浆。以上操作需注意无菌和局部冷环境。

将制成的肝匀浆在低温（）高速离心机上以离心，吸出上清液为组分，