GB 15193.10-2003 非程序性DNA合成试验

ICS07100

C53

中华人民.浏户、、国国家标准

GB15193.10-2003

代替GB15193.10-1994

非程序性DNA合成试验

UnscheduledDNAsynthesistest

2003-09-24发布2004-05-01实施

中华人民共和国卫生部*，

中国国家标准化管理委员会‘’卜

GB15193.10-2003

月U吕

本标准全文强制。

本标准代替GB15193.10-1994《非程序性DNA合成试验》

本标准与GB15193.10-1994相比主要修改如下:

—在“范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能

对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新

资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、

农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;

—在试“剂”中，增加了参“考阳性对照物”;7,12一二甲基苯并蕙(7,12-dimethylbenzathracene),2

乙酞氨基药(2-acetylaminofluorene),4-硝基哇琳氧化物(4-nitroquinolineoxide),N一甲基亚硝

胺(N-dimethylnitrosamine);

—在“UDS的液体闪烁计数显示法”中:增加“每组(包括对照组)至少做6个培养瓶。”

—在“UDS的放射自显影显示法”中，增加了“应同时设有阳性对照组和阴性对照组，包括加S-9

和不加S-9两种情况，’;

增加了“结果判定”内容。

自本标准实施之日起，GB15193.10-1994同时废止。

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准起草单位:浙江医科大学

本标准主要起草人:徐应年、丁辰。

本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。

GB15193.10-2003

非程序性DNA合成试验

范围

本标准规定了非程序性DNA合成试验的基本技术要求。

本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、

生物和物理因素的诱变性和/或致癌性，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成

分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、

食品工业用微生物等。用这种短期筛选方法可以检测出一些短期体外试验法所不能检出的诱变剂和/

或致癌剂

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1

非程序性DNA合成unscheduledDNAsynthesis,UDS

当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在S期以外的其他细胞周期，称非程序性DNA

合成。

3原理

正常情况下，于细胞有丝分裂周期中，仅S期是DNA合成期。当DNA受损伤时，损伤修复的

DNA合成主要在其他细胞周期，称程序外DNA合成，即UDS，因此发现UDS增高，即表明DNA发生

过损伤

在体外培养细胞中，用UDS的测量来显示DNA修复合成的主要关键在于如何鉴别很高水平的半

保留DNA复制和水平较低(充其量只有半保留DNA复制的5%)的UDS。这可以用同步培养将细胞

阻断于G1期并用药物(常用经基脉)抑制残留的半保留DNA复制后显示。同步培养可用缺乏必需氨

基酸精氨酸的培养基A〔DM)使DNA合成的始动受阻而使细胞同步于G1期

在这些半保留DNA合成明显抑制和阻断了的细胞中，UDS即可用3H-胸腺嗜吮核昔的掺人增加

显示。它可用放射自显影或液体闪烁计数法进行测量。

4试荆与器材

4.1试剂

全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用水为双蒸水。

4.1.1参考阳性物对照物:可用7,12一二甲基苯并蕙(7,12-dimethylbenzathracene),2一乙酞氨基药

(2-acetylaminofluorene),4-硝基哇琳氧化物(4-nitroquinolineoxide),N一甲基亚硝

胺(N-dimethylnitrosamine)

4.1.2细胞增殖用培养基:Eagle氏最低要求培养基(MinimalEssentialMedium，简称EMEM)85份，

小牛血清15份，加人青霉素、链霉素贮存液1份，使青霉素、链霉素的最终浓度分别为100单位及

100erg/mL,EMEM培养基可选用各种商品供应之粉末培养基按生产厂商提供资料配制并除菌。40C

冰箱贮存。

4.1.3同步用培养基:不含精氨酸之Eagle氏MEM培养基(ADM)98份，小牛血清2份，青霉素、链霉

素浓度同细胞增殖用培养基。

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