DB37/T 3085-2017 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测技术

ICS65.020.30

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T3085—2017

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经

典毒株的RT-PCR鉴别检测技术

Identificationofhighlypathogenicporcinereproductiveandrespiratorysyndrome

virusstrainandclassicalstrainbyRT-PCR

2017-12-29发布2018-01-29实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T3085—2017

前言

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：杜以军、齐静、丛晓燕、陈蕾、孙文博、陈智、郭立辉、于江、吴家强、李俊、

时建立。

I

DB37/T3085—2017

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的RT-PCR鉴别

检测技术

1范围

本标准规定了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测技术的操作要求。

本标准适用于高致病性及经典猪繁殖与呼吸综合征的实验室诊断、监测和流行病学调查等。

2实验室生物安全要求

实验室必须为生物安全Ⅱ级（BSL-2级）及以上实验室。

3规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

4术语与定义

下列术语与定义适用于本标准。

4.1

PCR

聚合酶链式反应。

4.2

SDS

十二烷基硫酸钠。

5仪器设备和试剂

5.1仪器设备

5.1.1微量移液器（最大量程分别为10μL、20μL、100μL、1000μL），带滤芯的枪头。

5.1.220000r/min低温高速离心机。

5.1.3电热恒温水槽。

5.1.4稳流稳压电泳仪。

5.1.5水平电泳槽。

1

DB37/T3085—2017

5.1.6凝胶成像系统。

5.1.7紫外透射反射分析仪。

5.1.8电磁炉。

5.1.9烧杯（1000mL）。

5.1.10电子天平精度为：0.001g。

5.1.11PCR扩增仪。

5.1.12组织匀浆器或研钵。

5.1.13-20℃冰柜。

5.1.142℃～8℃冰箱。

5.2试剂

除另有规定外，所有生化试剂均为分析纯。

5.2.1Trizol。

5.2.2氯仿。

5.2.375%乙醇。

5.2.4异丙醇。

5.2.5AMV反转录酶（200U/μL）。

5.2.6RNA酶抑制剂（40U/μL）。

5.2.7TaqDNA聚合酶（5U/μL）。

5.2.81.0%琼脂糖凝胶：见附录A.1。

5.2.950×TAE缓冲液：见附录A.2.1和A.2.2。

5.2.10焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌双蒸水：见附录A.3。

5.2.11DNA分子量标准DL2000。

5.2.12超纯水：符合GB/T6682，三级。

5.2.13引物：

上游引物P1:5-AAAGAYCAGATGGAGGAG-3；

下游引物P2:5-TRATG