DB12/T 651-2016 转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种定量检测 实时荧光PCR方法

ICS67.050

B23

DB12

天津市地方标准

DB12/T651—2016

转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种

定量检测实时荧光PCR方法

Detectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—

QuanlitativePCRmethodforherbicide-resistantsoybeanGTS40-3-2anditsderivates

2016-09-27发布2016-11-01实施

天津市市场和质量监督管理委员会发布

DB12/T651—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由天津市农村工作委员会提出。

本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天

津市质量技术监督宝坻检测中心。

本标准主要起草人：兰青阔、宛煜嵩、杨炳存、赵新、李亮、陈锐、朱珠、刘娜、王成、徐石勇。

本标准2016年9月首次发布。

I

DB12/T651—2016

转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种定量检测

实时荧光PCR方法

1范围

本标准规定了转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2转化体特异性定量PCR检测方法的术语和定义、

检测方法、结果计算。

本标准适用于转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种，以及制品中GTS40-3-2转化体的

定量PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

Lectin基因Lectingene

编码大豆凝集素的基因。

3.2

GTS40-3-2转化体特异性序列event-specificsequenceofGTS40-3-2

GTS40-3-2外源插入片段5′端与大豆基因组的连接区序列，包括35S启动子部分序列和大豆基因

组的部分序列。

4原理

根据大豆外源基因和内标基因特异性序列设计引物和TaqMan荧光探针，对标准样品和试样同时

进行实时荧光PCR扩增。根据标准样品模板拷贝数与Ct值间的线性关系，分别绘制外源基因和内标

基因的标准曲线。计算试样中外源基因和内标基因的拷贝数及其比值。

5检测方法

5.1试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。

5.1.1TaqMan荧光PCR反应试剂盒。

1

DB12/T651—2016

5.1.2引物和探针。

5.1.2.1Lectin基因。

lec-1215F：5′-GCCCTCTACTCCACCCCCA-3′

lec-1332R：5′-GCCCATCTGCAAGCCTTTTT-3′

lec-1269P：5′-AGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCAC-3′

预期扩增片段大小为118bp（参见附录A）。

5.1.2.2GTS40-3-2转化体特异性序列。

GTS40-3-2F：5'-CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTGG-3'

GTS40-3-2R：5'-GACTTGTCGCCGGGAATG-3'

GTS40-3-2P：5'-CGCAACCGCCCGCAAATCC-3'

预期扩增片段大小为