GB/T 15805.5-2018 鲤春病毒血症诊断规程

ICS65.020.30

B41

国

中华人民共和国国家标准

GB/T15805.5-2018

代替GB/T15805.52008

鲤春病毒血症诊断规程

Protocolofdiagnosisforspringviraemiaofcarp

2018-12-28发布2019-07-01实施

国家市场监督管理总局啦告

中国国家标准化管理委员会保叩

GB/T15805.5-2018

目lj昌

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准代替GB/T15805.5-2008《鱼类检疫方法第5部分：鲤春病毒血症病毒（SVCV）》。与

GB/T15805.52008相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：

增加了缩略语；

一一增加了酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）检测鲤春病毒血症

病毒（springviraemiaofcarpvirus,SVCV）抗尿的方法；

一一增加了间接免疫荧光抗体试验（indirectimmunofluorescentantibodyte日t,IFAT）检测svcv

抗原的方法；

增加｜了实时定量PCR(rcal-timePCR）检测svcv核酸的方法；

增加了鲤春病毒血症（springviraemiaofcarp,SVC）的综合判定。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由中华人民共和国农业农村部提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。

本标准起草单位：宁波市海洋与渔业研究院、全国水产技术推广总站、中华人民共和国北京海关、中

华人民共和国蛇口海关。

本标准主要起草人：王建平、张利峰、江育林、徐胜戚、高隆英、吴雄飞、陈爱平、沈伟良。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

一一－GB/T15805.1-1995;

一一－GB/T15805.5-2008。

I

GB/T15805.5-2018

为0.25%。

A.9抽提液E

异戊醉、三氯甲皖、饱和酣分别按1:24:25的比例泪合，密闭避光保存。

A.10抽提；在I

异戊醉与三氯甲皖按1:24的比例海合，密闭避光保存。

A.11EB溶液

用去离子水配制成10mg/mL的浓缩液。用时每10mL电泳液或琼脂中力/J1µL。

A.12PBST(pH7.4)

在1000mL水中，分别加入:,;laCl8g、KC!0.2g、KH2PO.,0.2g、Na2HP01.lZH202.9g、吐温20

0.05mL，摇匀后，4℃保存。

A.13TMB（四甲基联苯服）使用液

在10mL底物稀释液（见A.16）中依次JJ[I入2mg/mLTMB（使用元水乙醇溶解）0.5mL、0.75%

H20232.0µL。

A.140.01mol/LPBS(pH7.2~7.4)

在1000mL水中，分别为I]入:,;laCl8g、KC!0.2ιKH2PO,,0.2g、Na2HPO,,•lZH202.9g，充分搅

拌完全溶解后，4℃保存。

A.15固定液

将丙曲同与无水乙醇以3:7（体积比）混合的溶液。

A.16底物稀释液（pH5.5磷酸盐拧穰酸）

在50mL蒸馆水中力I]入0.2mol/LNa2HPO,(28.4g/L)25.7mL、0.1mol/L拧朦酸09.Zg/L)

24.3mL。

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GB/T15805.5-2018

附录B

（资料性附录）

svcvG蛋白片段

下列为svcvG蛋白基因片段序列，其中带下划的基因片段为RT-PCR扩增引物，阴影处为荧光

PCR的引物和探针。

1aacagacatcatgtctatcatcagctacatcgcattccttttgctaattgactccaactt

61aggaatccccatatttgttccatctggtcgaaatatatcatggcagcctgtgattcagcc

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361tgcatcagggactgatgaagatctggggtttccccctcaaagttgcggatgggcatctgt

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541aatgaaagggaatcactctatttggatcacagaggagactgtacagcatgagtgtgcaaa

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841ctccggtcaccgccccggattagacttgattgacacagtcttcaatttggaaaatgtagt

901ggaatatactttgtgtgaagggactaaaaggaaaatcaataaacaagagaagctgacatc

961agtggatttgagctatttggctccaagaatcggagggttcggatcagtatttagagtgag

注：引物SVCVR2的碱基位置275～304；引物SVCR4的碱基位置383～406；引物SVCFl的碱基位置965～988;

荧光RTPCR上游引物的碱基位置347～368；荧光RTPCR探针的碱基位置391～412；荧光RTPCR下游召｜

物的碱基位置459～482。

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GB/T15805.5-2018

附录C

（资料性附录）

鲤春病毒血症（SVC)

C.1疾病描述

鲤春病毒血症（SVC）是由弹状病毒科水泡性病毒属的暂定种鲤春病毒血症病毒（SVCV）感染鱼类

引起的急性、出血性疾病。该病具较高的传染性、致死率。病鱼以全身出血及腹水为特征。该病通常于

春季低水温期暴发并引起幼鱼和成鱼死亡。为此被视为寒冷地区的一种地方性疾病（巳ndcmicincool

region）。鲤春病毒血症最早流行于欧洲、中东和俄罗斯，近年来传播到美洲和亚洲。世界动物卫生组

织（OIE）将其列为必报的疫病种类，为我国一类动物疫病。

C.2宿主

有记录的自然发生SVC感染的宿主有鲤Cy户’in11scarρ1οCl/rρiu、锦鲤（‘yρri1111scarρiukui、欧洲

魄Carassiuscarassi阳、六级她Si/urus只lunis、链Hypophthalmichthys川／itri.T，梅ArislichIhys110-

hiIis，草包℃f(')/0阶αryn只odonidPllu，金鱼Curassi川Q盯αtus，圆眼雅罗鱼LPuciscusid旧，丁蜗τi旧Q

tin「u。

通过浸浴实验能感染svcv的鲤科鱼类有拟鲤Rutilu町、rutilus和斑马鱼。mio俐’io。在实验条

件下也可被传染的鱼类有北方梭子鱼F:su.J"I川ius,YIT制LPhis/nrp/i门，IaIu川太阳鱼l,p问川、

gihbosus等。

所有年龄组的鱼都可被感染