GB/T 15805.3-2018 病毒性出血性败血症诊断规程

ICS65.020.30

B41

国；

中华人民共和国国家标准

GB/T15805.3-2018

代替GB/T15805.32008

病毒性出血性败血症诊断规程

Codeofdiagnosisforviralhaemorrhagicsepticaemia(VHS)

2018-07-13发布2019-02-01实施

国家市场监督管理总局峪非

中国国家标准化管理委员会0(..'I(J

GB/T15805.3-2018

目lj昌

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准代替GB/T15805.3-2008《鱼类检疫方法第3部分：病毒性出血性败血症病毒

(VHSV）》。本标准与GB/T15805.3-2008相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：

增加了采样；

一一增加了临床症状；

一一一增加了间接免疫荧光抗体试验（indirectimmunofluorescentantibodytest,IFAT）检测病毒性

出血性败血症病毒抗原的方法；

一一增加了酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）检测病毒性出血性

败血症病毒抗原的方法；

增加了RT-PCR和荧光RT-PCR检测方法；

一一增加了综合判定；

一一增加了VHS的规范性附录。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机胸不承担识别这些专利的责任。

本标准由中华人民共和国农业农村部提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。

本标准起草单位：全国水产技术推广总站、山东出入境检验检疫局、深圳出入境检验检疫局、北京出

入境检验检疫局。

本标准主要起草人：余卫忠、孙、涛、尹伟力、贾鹏、吕永辉、谷强、张利峰、岳志芹、王津津、江育林。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

一－GB/T15805.11995;

GB/T15805.32008o

I

GB/T15805.3-2018

附录A

（规范性附录）

试剂配制

A.10.01mol/LPBS(pH7.2~7.4)

在1000mL双蒸水中按顺序加入以下试剂：Na2HP011.19g,NaH2P0,10.22g,NaCI8.5g，调pH

为7.2～7.4充分搅拌溶解后，4℃保存。

A.2固定液

30%丙嗣与70%乙醇（体积比）的泪合物。

A.3PBST(pH7.4)

在1000mL双蒸水中按顺序加入以下试剂：NaCl8.0g,KC!0.2g,KH2P0,10.址，Na2HP0,1•

12H202.饵，调pH为7.4后，加入Twccn-20充分搅拌摇匀后，4℃保存。

A.4包被稀释液（pH9.6)

在1000mL双蒸水中按顺序力II入以下试剂：>la2C031.59g,NaHC032.93g，调pH为9.6，充分搅

拌溶解后，4℃保存。

A.5底物OPD溶液pH5.0

先用600mL0.1mol/LNa2HP0,1和300mL0.1mo!/L拧棱酸混合成底物稀释液。然后取

100mL底物稀释液，往其中摇入80mg的邻苯二胶（OPD），然后加入80,uL的H202，放5min不变色

即可使用（临使用前配制）。

A.6CTAB溶液

CTAB溶液：按CTAB2%,NaCl1.4mol/L,EDTA20mmol/L,Tris-HCl20mmol/LpH7.5

配制。用前力｜｜琉基乙醇至终浓度为o.25%（配制时在60mL水中顺序力II入：8.19gNaCl,0.774g

EDTA,1.21gTris，约0.25mL~0.3mL浓盐酸，使pH=7.5～8.0，再加入2gCTAB，溶完后；最后Jm水

到100mL)。

A.7抽提液E

1mo!/LTris水溶液饱和的酣：三氯甲炕：异戊醇＝25:24:1j昆合，密闭避光保存。

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GB/T15805.3-2018

A.8抽提；在I

将三氯甲；皖：异戊醇按24:1的比例福合，密闭避光保存。

A.9TBE电泳缓冲液（5倍浓缩液）

在1000mL双蒸水中按顺序加入以下试剂：Tris54g，棚酸27.5g,EDTA2.922g，用5mol/L的

HCl调pH为8.0保存备用。

A.10EB(EthidiumBromide，核酸染色荆）

用水配制成5mg/mL的放缩液。用时每10mL电泳液或琼脂中加1µL。

A.11电泳样品缓冲液

每100mL水溶液中含：澳酣蓝0.25g,ti在糖40g。

10

GB/T15805.3-2018

附录B

（资料性附录）

扩增VHS病毒N基因的序列

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