LY/T 2675-2016 石斛种质鉴定技术规范

ICS65.020.20

B66

中华人民共和国林业行业标准

LY/T2675-2016

石角斗种质鉴定技术规范

TechnicalmanualofidentificationforDendrobiumspp.Germplasms

2016-07-27发布2016-12-01实施

〈国家林业局发布

到时

LY/T2675-2016

目次

前言……........……….........….........…………….......1

1范围…..

2术语和定义………………

3种质鉴定………........………….........………..........1

附录A(规范性附录)检测实验方法……………………20

附录B(资料性附录)石制薄层色谱参考图谱…………........……….31

附录c(资料性附录)石制分类描述……………………35

附录D(资料性附录)石制毒副残留检测………………39

LY/T2675-2016

目。吕

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由国家兰科植物种质资源、保护中心(深圳市兰科植物保护研究中心)提出。

本标准由国家林业局归口。

本标准负责起草单位:国家兰科植物种质资源保护中心(深圳市兰科植物保护研究中心)。

本标准参加起草单位:清华大学、北京蓝标一成科技有限公司。

本标准主要起草人:刘仲健、梁琼麟、赵田、罗毅波、陈利君、张国强、邵自星、梁晓萍、邹婷婷、

孙阳纳、王美娜。

I

LY/T2675-2016

石角斗种质鉴定技术规范

范围

本标准规定了石角斗种质鉴定技术规范及相应指标。

本标准适用于铁皮石角斗CDendrobiumωtenatumLindley,DendrobiumofficinaleKimura&.

Migo)、金钗石角斗CDendrobiumnobileLindley)、鼓槌石角斗CDendrobiumchrysoto:rumLindley)、流苏石

角斗CDendrobiumfimbriatumHook.)、齿瓣石角斗CDendrobiumdevonianumPaxton)、兜唇石角斗[Den

drobiumαphyllumCRoxb.)C.FischerJ、叠鞠石角斗CDendrobiumdenneαnumKerr)、美花石角斗CDen­

drobiumloddigesiiRolfe)、霍山石角斗CDendrobiumhuoshanenseC.Z.Tang&.S.J.Cheng)等种的实生

苗、组织克隆苗、鲜茎、干燥茎的种质鉴定。

注1.铁皮石角斗拉丁名DendrobiumcatenatumLindley参考FloralofChina.2009，又名黄石角斗。

注2.铁皮石角斗拉丁名Dendrobium0万ìcinaleKimura&Migo参考CITES附录Checklist。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

种质germplasms

九个石角斗种的实生苗、组织克隆苗、鲜茎、干燥茎遗传物质所属物种。

2.2

实生苗seedling

直接由种子繁殖的幼苗，包括播种苗、野生苗。

2.3

组织克隆苗cloneplantlet

通过元性繁殖得到的幼苗，包括通过愈伤组织进行组织培养得到的幼苗和成体植株出芽分离栽培

得到的幼苗。

3种质鉴定

3.1实生苗

3.1.1描述说明

铁皮石麟、金钗石角斗、鼓槌石角斗、兜唇石角斗描述为出瓶后90d苗，其他种类石角斗为出瓶后7d苗，整

个培养周期不超过12个月。野生苗则为与播种苗处于相同生长阶段的幼苗。

3.1.2铁皮石斜

3.1.2.1形态

茎直立，丛状，肉质，圆柱形，长2cmr--....-7cm，直径0.4cmr--....-0.6cm，不分枝，具多节，节间长0.6cm~

1.0cm，中间稍膨大;互生3枚r--....-5枚叶片，纸质，长圆状披针形，长1cmr--....-3cm，宽0.5cmr--....-1.0cm，先

LY/T2675-2016

端钝并多少钩转，叶基部下延为抱茎的鞠，鞠通常短于抱茎的节长，边缘和中肋常带淡紫色，叶销常具紫

褐色晕状斑。

指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图1)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

290

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DNA检测

本标准中铁皮石角斗样品(样品批广南)已经完成基因组测序，基因组大

小1.1G[基因组测序详细信息见论文:TheDendrobiωncαtenatumLindl.genomesequenceprovides

insightsintopolysaccharidesynthase,floraldevelopmentandadaptiveevolution.ScientificReports6:

19029(2016).DOI:10.1038/srep19029;基因组序列NCBI索取号为JSDNOOOOOOOO(http://www.

ncbi.口1m.nih.gov/bioproject/262478)]。

3.1.3金钗石斜

3.1.3.1形态

茎直立，丛状，肉质，具分囊，稍扁的圆柱形，长3cm'"'--'8cm，中部直径。.7cm'"'--'0.9cm，中部以上回

折弯曲，基部明显收狭，具多节，节有时稍肿大，节间多少呈倒圆锥形，长0.8cm,..___,1.5cm;具3枚'"'--'5枚

叶，叶革质，长圆形，长4cm'"'--'6cm，宽0.6cm'"'--'0.7cm，先端钝并且不等二裂，基部具抱茎的鞠。

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指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图2)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

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斑点。

3.1.4鼓槌石斜

3.1.4.1形态

茎直立，丛状，肉质，长卵形，长0.8cm"___1.

0.4cm"___l.Ocm;近顶端具1枚，.___2枚叶，叶革质，长圆形，长1.0cm,.___5.0cm，宽0.4cm,,___1.0cm，先端

急尖而钩转，基部收狭，但不下延为抱茎的黯。

3.1.4.2指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图3)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

3

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时间/min

图3鼓槌石角斗对照指纹图谱

3.1.4.3薄层色谱鉴别

照薄层色谱法试验(见A.2)，供试品色谱中，应在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光

斑点。

3.1.5流苏石斜

3.1.5.1形态

茎直立或斜立，肉质，细圆柱形，长3cm,.-..__,8cm，中部直径。.3cmr斗.4cm，具多节，节间长0.8cm,.-..__,

1.7cm;具5枚，.-..__，8枚叶，日叶十纸质，长圆形，长2.8cm丑1γγ卢，.._、.‘、斗.、、

部具抱茎的鞠。

指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图4)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

4

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时间/min

图4流苏石角斗对照指纹图谱

薄层色谱鉴别

照薄层色谱法试验(见A.2)，供试品色谱中，应在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光

斑点。

3.1.6齿瓣石制

3.1.6.1形态

茎直立或斜立，肉质，细圆柱形，长4cm.-......8.5cm，中部直径。.1cm.-......0.2cm，具多节，节间长0.8cm.-......

1.5cm;具3枚.-......5枚叶，叶纸质，长圆形，长2.2cm.-......3.1cm，宽0.4cm.-......0.6cm，先端急尖，不对称，基

部具抱茎的踏，叶黯常具紫红色斑点。

指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图5)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

5

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唱

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3.1.7兜唇石像

3.1.7.1形态

l.lcm，先端渐尖，

3.1.7.2指纹图谱

照高效液相色谱法总卢户图吨哗主(见A.1.5)试验，记花明(见L6)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱击对以1日纹图i普经相似度计算，相似度不低于0.85。

6

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时间/min

3.1.8叠鞠石b

形态

茎直立，肉质注目圆柱形，长2cm----8cm，中部直径。.5cm'""'-'0.8cm，具多节，节间长lt..Zcm~1.5cm;叶

纸质，披针形或椭啡，长2.5cm----3.2cm_，__~_Q6_cmr--.-0.liII1.，_1tJ端急品2三阶，时具抱茎的销。

指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征程纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图，中)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算J相似度不低于0.85。

7

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时间/min

图7叠黯石斜对照指纹图谱

3.1.9美花石斜

3.1.9.1形态

茎下垂或卷曲，肉质，细圆柱形，长3cm,..__,6.5cm，中部直径0.2cm"'__'O.4cm，具多节，节间长0.5cm"'__'

0.8cm;具3枚，..__，5枚叶，叶纸质，披针形或椭圆形，长0.8cm,..__,1.5cm，宽0.4cm,..__,0.6cm，先端急尖，不

对称，基部具抱茎的销。

指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图8)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

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时间/min

图8美花石制对照指纹图谱

3.1.10霍山石斜

3.1.10.1形态

茎直立，肉质，长2cmr-...-7cm，从基部上方第二节膨大，然后向上开始逐节变细，基部上方茎直径

0.3cm丑1γγγ/户卢r-...-‘、、-‘、.、‘

色斑点;叶3枚r-...-7枚互生于茎的上部，斜出，舌状长圆形，长1cmr-...-3cm，宽0.3cm丑lr-...-1.0cm，先端钝并

且微凹，叶脉两侧叶片略不对称，基部具抱茎的黯，叶革自膜质。

3.1.10.2指纹图谱

照高效液相色谱法结合特征指纹图谱检测法(见A.1.5)试验，记录色谱图(见图9)。按色谱指纹图

谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，相似度不低于0.85。

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3.2.1

形态

cm~8cm，直径0.4Sm.~O-:-6cm!.磊孙枝，具多节，节间长0.6cm~

1.0cm，中间稍膨大;互的被5山苦攻防衣町孀十形，/::71~3cm，宽0.5cm~1.0cm，先

端钝并多少钩转，叶基部下延为抱工的啦，革自通立短$抱去响节长，边缘和中肋常带淡紫色，叶鞠常具紫

褐色晕状斑。

指纹图谱

同3.1.2.2。

薄层色谱鉴别

同3.1.2.3。

DNA检测

同3.1.2.4。

10

LY/T2675-2016

3.2.3金钗石斜

形态

茎直立，丛状，肉质，具分寞，稍扁的圆柱形，长3cm~8cm，中部直径。.7cm~0.9cm，中部以上回

折弯曲，基部明显收狭，具多节，节有时稍肿大，节间多少呈倒圆锥形，长0.8cm~1.5cm;具3枚~5枚

叶，叶革质，长圆形，长4cm~6cm，宽0.6cm~0.7cm，先端钝并且不等二裂，基部具抱茎的黯。

指纹图谱

同3.1.3.2。

薄层色谱鉴别

同3.1.3.3。

3.2.4鼓槌石角斗

3.2.4.1形态

3.2.4.2指纹图谱

同3.1\(.20

薄层色谙鉴别

同3.1.4.~0

形态

叭叭/r'

茎斜立，质地硬，画柱形或有肘基部上方稍呈纺锤形，长3cm~8cm，直维0.3cm~0.4cm，J'!.多

节，节间长0.8cm~2.0cm;叶二列，革质J长圆形或长圆状即十形，长3你~5cm，宽0.6cmr-.._.,0.8cm,

先端急尖，有时稍2裂，基部具紧抱牙茎的革质销。

指纹图谱

同3.1.5.2。

薄层色谱鉴别

同3.1.5.3。

3.2.6齿瓣石斜

形态

茎直立，细圆柱形，长4cm~10cm，直径。.1cm~0.2cm，不分枝，表面绿色带紫色斑点;具多节，

节间长1cmr-.._.,2cm;叶二列，纸质，互生于整个茎上，狭卵状披针形，长3cm~5cm，宽0.4cm~0.6cm,

LY/T2675-2016

先端长渐尖，基部具抱茎的翰，叶鞠常具紫红色斑点。

指纹图谱

同3.1.6.2。

3.2.7兜唇石制

形态

茎直立或倾斜，丛状，肉质，细圆柱形，长3cmr-.-10cm，直径。.3cmr-.-0.6cm，具3节r-.-6节间，节间

长0.4cmr-.-1.0cm;互生3枚r-.-5枚叶，叶纸质，披针形或卵状披针形，长1cmr-.-4cm，宽0.6cmr-.-

1.1cm，先端渐尖，基部具鞠，叶鞠纸质，干后浅白色，黯口呈杯状张开。

3.2.7.2指纹图谱

同3.1.7.20

3.2.8叠鞠石斜

形态

r

茎直立或斜立，细圆柱形，长2cmr-.-8cm，直径0.7cm斗.9cm，表面绿色，具多节，节间长1.2cmr-.-

3.5cm;叶革质，线形或狭长圆形，长4cmr-.-10cm，宽1.0cmr-.-1.2cm，先端钝且微凹或有时近锐尖而

一侧稍钩转，基部具抱茎的黯。

指纹图谱

同3.1.8.2。

3.2.9美花石制

3.2.9.1形态

茎柔弱，常下垂，肉质，细圆柱形，长3cmr-.-10cm，直径0.2cm,..._,0.6cm，具多节，节间长0.5cmr-.-

1.5cm，浅绿色;叶二列互生，纸质，舌形、长圆状披针形或稍斜长圆形，通常长0.8cmr-.-3.0cm，宽

0.6cmr-.-1.0cm，先端锐尖而稍钩转，基部具黯，干后上表面的叶脉隆起呈网格状，叶黯膜质，干后黯口

常张开。

指纹图谱

同3.1.9.2。

3.2.10霍山石斜

形态

茎直立，肉质，密集着生，自基部向上明显变细，长1cmr-.-3cm，基部上方直径0.3cmr-.-0.5cm，不

分枝，具3节r-.-7节，节间长1.0cmr-.-1.2cm，淡黄绿色，有时带淡紫红色斑点;叶革质，2枚r-.-3枚互生

于茎的上部，斜出，舌状长圆形，长0.8cmr-.-1.5cm，宽0.3cmr-.-O.4cm，先端钝并微凹，基部具抱茎的

革肖，叶黯膜质，宿存。

指纹图谱

同3.1.10.2。

12

LY/T2675-2016

3.3鲜茎

3.3.1铁皮石倒

3.3.1.1形态

呈圆柱形，肉质，长9cm.-...,,35cm，直径。.2cm'-""'O.4cm，不分枝，具多节，节间长1.3cm.-..."1.7cm;

表面黄绿色，或具紫红色条纹;叶鞠常具紫斑，老时其上缘与茎松离而张开，并且与节留下一个环状铁青

色的间隙。气微，味淡，嚼之有教性。

在显微鉴别(见附录A.3)下，茎横切面表皮细胞I列，扁平，外壁及侧壁稍增厚、微木化，外被黄色

角质层，有的外层可见元色的薄壁细胞组成的叶黯层;基本薄壁组织细胞多角形，大小相似，其间散在多

数维管束，略排成4圈.-...，，5圈，维管束外韧型，外围排列有厚壁的纤维束，有的外侧小型薄壁细胞中含有

硅质块。含草酸钙针晶束的教液细胞多见于近表皮处。

指纹图谱

同3.1.2.20

含量检测

照高效液相色谱法(见A.1.6)测定，按干品计，袖皮素含量应不低于0.0024%。

3.3.1.4薄层色谱鉴别

同3.1.2.3。

DNA检测

同3.1.2.4。

3.3.2金钗石解

形态

呈稍扁的圆柱形，肉质状肥厚，长20cm.-...,,40cm，直径可达1.3cm，上部多少回折状弯曲，基部明显

收狭，不分枝，具多节，节有时稍肿大;节间多少呈倒圆锥形，长2cm.-...,,4cm;具抱茎的叶黯。气微，

味苦。

在显微鉴别(见A.3)下，茎横切面表皮细胞I列，扁平，外被鲜黄色角质层。基本组织细胞大小较

悬殊，有壁孔，散在多数外韧型维管束，排成7圈.-...，，8圈。维管束外侧纤维束新月形或半圆形，其外侧薄

壁细胞有的含类圆形硅质块，木质部有1.-...，，3个导管直径较大。含草酸钙针晶细胞多见于维管束旁。

指纹图谱

同3.1.3.2。

含量检测

照高效液相色谱法(见A.1.6)测定，按干品计，袖皮素含量应不低于0.0024%;照气相色谱法(见A.4)

测定，按干品计，石角斗碱含量应不低于0.4%。

薄层色谱鉴别

同3.1.3.3。

13

LY/T2675-2016

3.3.3鼓槌石斜

形态

呈粗纺锤形，肉质，长6cm-------30cm，中部直径1.5cm-------5.0cm，具2节-------5节;表面光滑，黄绿色或

黄色，老后有时具红色，具多数圆钝的条棱;无叶销。气微，老茎嚼之有黠性，