DB53/T 903-2019 金钗石斛组培育苗技术规程

ICS65.020

B38

云南省地方标准

DB53/T903—2019

金钗石斛组培育苗技术规程

2019-03-01发布2019-06-01实施

云南省市场监督管理局发布

DB53/T903—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

本标准由云南省德宏热带农业科学研究所提出。

本标准由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。

本标准起草单位：云南省德宏热带农业科学研究所。

本标准主要起草人：高燕、白燕冰、李泽生、李桂琳、姜艳、罗凯、周侯光、姚春、李薇莎。

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DB53/T903—2019

金钗石斛组培育苗技术规程

1范围

本标准规定了金钗石斛（DendrobiumnobileLindl.）组培育苗的组培苗生产条件、培养基配制、

外植体选择及处理、接种及瓶苗生产、假植苗培育、包装、标志与运输等要求。

本标准适用于金钗石斛组培苗工厂化生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB53/T623-2014“魔帝”系及“肉饼”系兜兰盆花生产技术规程

3组培苗生产条件

3.1组培室

组培室必须配备灭菌室、储藏室、接种室、培养室等组培生产的基本条件。灭菌室用于接种工具和

培养基消毒；储藏室用于灭菌好的培养基储藏；接种室用于接种材料消毒、接种、容器苗转接；培养室

用于容器苗培养。

3.2设备

组培育苗设备有高压灭菌锅、超净工作台、电热消毒器，冰箱、电子天平（精度0.0001）、电子

称（精度0.01）、空调、臭氧发生器、除湿机等。

玻璃器皿：量筒、容量瓶、烧杯、培养瓶等。

3.3试剂

培养基组成试剂包括：硝酸钾、硝酸铵、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、无水氯化钙、七水硫酸亚铁、

乙二胺四乙酸二钠、一水硫酸锰、七水硫酸锌、硼酸、碘化钾、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、甘氨酸、盐

酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇。

外植体消毒试剂包括：次氯酸钠、酒精、消毒液等。

酸碱调节试剂包括：盐酸、氢氧化钠。

3.4添加物

添加物包括马铃薯和香蕉。

4培养基配制

4.1培养基组成

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培养基为改良的MS（Murashige和Skoog，1962）基本培养基，具体配方参见附录A。

4.2母液配制

母液用蒸馏水或超纯水配制，配制方法见附录A。大量元素母液室温密封保存，铁盐、微量元素、

有机附加物母液置于4℃保存，植物生长调节剂避光保存于4℃条件下。母液如有沉淀或有微生物和藻

类生长，应废弃不用。

4.3培养基配制

培养基配制要求如下：

a)根据所需培养基配方用量，按比例吸取母液放入烧杯，按附录A称取琼脂粉和蔗糖用纯净水加热

充分溶解，有机添加物要去皮打浆，加入至容器内用纯净水定容后，搅拌均匀。

b)用1.0mol/L盐酸或1.0mol/L氢氧化钠调整培养基酸碱度值为pH5.8。

c)培养基要趁热分装到培养器皿内，及时密封。

4.4培养基及蒴果消毒

4.4.1培养基消毒

培养基消毒要求如下：

a)将分装并密封好的培养基放入高压消毒锅内消毒。

b)加热至0.11MPa压力下，温度121℃下，灭菌20min。

c)关闭电源，自然冷却至压力表指针降至0时，开锅取出培养基。

4.4.2蒴果消毒

流水冲洗20min～30min,用0.1%的洗洁精或洗衣粉溶液漂洗，用自来水冲洗干净，纯净水冲洗2

次～3次，置于玻璃瓶中备用。在超净工作台上用75%的酒精浸泡消毒60s～80s，放入10％次氯酸钠

溶液中轻轻摇动，消毒15min～20min，用无菌水清洗5次～6次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分，或

用酒精灯烘烤蒴果表面至干燥。

4.5培养基储藏

经过灭菌的培养基，及时转运至储藏室储藏，放置3d后，无污染培养基在7d内使用完毕。

5外植体选择及处理

5.1外植体选择

选择优质高产、抗性强、农艺性状优良、生长健壮、无病虫害、无机械损伤的母株,采集成熟未开

裂的蒴果。

5.2采集时间

10月～11月选择晴天的早上露水干后采集蒴果。采集的蒴果加标签，标明母株编号、采集地点、

采集时间等。蒴果若要长途运输或储藏，宜用保湿材料包扎。未用的蒴果应放入密封容器中置于4℃保

存，保存时间不应超过30d。

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6接种及瓶苗生产

6.1接种前准备

6.1.1接种前，接种人员用洗洁剂洗手，然后换鞋、工作服、带上口罩、帽子方可进接种室。

6.1.2开启超净工作台紫外灯杀菌20min～30min。接种时，关闭紫外灯，开启风机，同时开启