GB 29704-2013 食品安全国家标准 动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多残留的测定 超高效液相色谱-串联质谱法

ICS

G

中华人民共和国国家标准

GB29704—2013

食品安全国家标准

动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多

残留的测定超高效液相色谱-串联质谱法

DeterminationofCyromazineandMelamineresidueinanimalderivedfoodbyUltra

PerformanceLiquidChromatography-tandemMassSpectrometricmethod

（电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准）

2013-09-16发布2014-01-01实施

中华人民共和国农业部发布

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

目次

目次I

前言II

动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多残留的测定超高效液相色谱-串联质谱法3

1范围3

2规范性引用文件3

3原理3

4试剂和材料3

5仪器和设备4

6样品的制备与保存4

6.1试料的制备4

6.2试料的保存5

7测定步骤5

7.1基质匹配标准曲线的制备5

7.2提取5

7.3净化5

7.4测定5

7.5空白试验6

8结果计算和表述7

9检测方法灵敏度、准确度和精密度7

9.1灵敏度7

9.2准确度7

9.3精密度7

附录A8

I

前言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准系国内首次发布的国家标准。

II

动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多残留的测定

超高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺残留量检测的制样和超高效液

相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于鸡的肌肉、肾脏和蛋中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺残留量的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其

随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标

准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新

版本适用于本标准。

GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试料中残留的环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺，用3%三氯乙酸溶液提取，MCX柱净化，超

高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

4试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。

4.1环丙氨嗪、三聚氰胺对照品：含量≥98.0%。

4.2三氯乙酸

4.3乙腈：色谱纯。

4.4甲醇：色谱纯。

4.5甲酸

4.6氨水

4.7乙酸铵

4.8MCX固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者。

3

4.93%三氯乙酸溶液：取三氯乙酸3g，用水溶解并稀释至100mL。

4.102％甲酸水溶液：取甲酸2mL，用水溶解并稀释至100mL。

4.115%氨化甲醇溶液：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL。

4.1250%乙腈水溶液：取乙腈50mL，用水溶解并稀释至100mL。

4.130.1mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵7.71g，用水溶解并稀释至1000mL。

4.141mg/mL环丙氨嗪、三聚氰胺标准贮备液：精密称取环丙氨嗪和三聚氰胺对照品10

mg，分别于10mL棕色量瓶中，用50%乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL

的环丙氨嗪标准贮备液和三聚氰胺标准贮备液。2～8℃保存，有效期3个月。

4.1510μg/mL环丙氨嗪和三聚氰胺混合标准工作液：精密量取1mg/mL的环丙氨嗪标准

贮备液和三聚氰胺标准贮备液各1.0mL，于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，

配制成浓度为10μg/mL的环丙氨嗪和三聚氰胺混合标准工作液。2～8℃保存，有效期3个

月。

5仪器和设备

5.1超高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.00001g。

5.3天平：感量0.01g。

5.4涡旋混合器

5.5离心机

5.6氮吹仪

5.7离心管：50mL。

5.8微孔滤头：0.2µm。

6样品的制备与保存

6.1试料的制备

6.1.1鸡蛋

取新鲜或冷冻空白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。

——取均质后的供试样品，作为供试试料。

——取均质后的空白样品，作为空白试料。

——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.1.2鸡的肌肉肉和肾脏组织

取新鲜或冷冻空白或供试组织，绞碎，并使均质。

4

——取均质后的供试样品，作为供试试料。

——取均质后的空白样品，作为空白试料。

——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2试料的保存

-20℃以下保存。

7测定步骤

7.1基质匹配标准曲线的制备

精密量取10μg/mL环丙氨嗪和三聚氰胺混合标准工作液适量，用95%乙腈水溶液稀释，

配制成浓度为2、5、10、20、50和100ng/mL的系列混合标准溶液，并各取1.0mL，分别溶

解经提取、净化及吹干后的6份空白试料残余物，过滤，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，基质匹配对照溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求

回归方程和相关系数。

7.2提取

称取试料（2±0.02）g，于50mL离心管中，加3%三氯乙酸溶液20mL，涡旋混合30s,超

声10min，静置10min，10000r/min离心10min，取上层液，备用。

7.3净化

MCX柱依次用甲醇3mL和水3mL活化，取备用液10mL过柱，加2%甲酸水溶液3mL、

甲醇3mL淋洗，抽干，加5%氨化甲醇溶液3mL洗脱，抽干，收集洗脱液，于50℃氮气吹干，

用95%乙腈水溶液1.0mL溶解残余物，滤膜过滤，供超液相色谱-串联质谱测定。

7.4测定

7.4.1色谱条件

色谱柱：BEHHILIC色谱柱（50mm×2.1mm，粒径1.7μm），或相当者；

流动相：A：乙腈；B：0.1mol/L乙酸铵溶液；

梯度为：0～2.5min，95％A线性变化至80％A；2.5～4min，保持95％A；

流速：0.3mL/min；

柱温：30℃；

进样量：10µL。

5

7.4.2质谱条件

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应监测；

电离电压：3.0kV；

源温：110℃；

雾化温度：350℃；

锥孔气流速：50L/h；

雾化气流速：650L/h；

定性、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表1。

表1定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量

定性离子对定量离子对锥孔电压碰撞