YC/T 406-2011 烟用添加剂中马兜铃酸A的测定 高效液相色谱法

ICS65．160

X85

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备案号：33251—201Y口

中华人民共禾口国烟草行业标准

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406—201

YC／T

烟用添加剂中马兜铃酸A的测定

高效液相色谱法

DeterminationofaristoIochicacidAintobaccoadditives--

method

Highperformanceliquidchromatographic

201

1-08-02发布

国家烟草专卖局发布

406—2011

YC／T

刖置

1．1

本标准按照GB／T2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由国家烟草专卖局提出。

144／SC8)归口。

本标准由全国烟草标准化技术委员会烟用材料分技术委员会(SAC／TC

本标准起草单位：云南烟草科学研究院、红塔烟草(集团)有限责任公司、红云红河烟草(集团)有限

责任公司。

本标准主要起草人：张承明、陈永宽、缪明明、者为、王璐、孟昭宇、贺兵、夏建军、杨光宇、陆舍铭、

宾婕。

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YC／T

烟用添加剂中马兜铃酸A的测定

高效液相色谱法

1范围

本标准规定了烟用添加剂(香精和料液)中马兜铃酸A的测定方法——高效液相色谱法。

本标准适用于烟用添加剂(香精和料液)中马兜铃酸A的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法

145．10—2003烟用香精抽样

YC／T

3原理

采用含o．1％甲酸的甲醇一水混合溶剂萃取烟用添加荆中的马兜铃酸A，经高效液相色谱仪分离，以

紫外检测器测定，外标法定量。

4试剂与材料

除特殊要求外，均使用分析纯试剂。

4．1水，符合GB／T6682中一级水的要求。

4．2乙腈，CHsCN。色谱纯。

4．8甲酸，HCOOH。

4．4甲醇，CH。oH。

4．5马兜铃酸A，C。，H。，NO，(CAS：313—67—7)，纯度>97％。

4．6甲醇水混合溶剂，体积比9：1。

4．7萃取溶剂：取1mL甲酸(4．35智'T1000mL容量瓶中，用甲醇一水混合溶剂(4．6)定容至刻度。

4．8标准溶液

4．8．1一级标准储备液

mL容量瓶中，

称取100mg(精确至0．1mg)马兜铃酸A(4．5)，用萃取溶剂(4．7)溶解转移至100

定容至刻度并摇匀。在2℃～8℃下保存，有效期1个月。

4．8．2二级标准储备液

并摇匀。在2℃～8℃下保存，有效期1个月。

4．8．3标准工作溶液

000000000

分别准确移取100,uL、300p-L、500,uL、1pL、2pL、4pL二级标准储备液(4．8．2)至

50mL容量瓶中，用萃取溶剂(4．7)定容至刻度，得到系列标准工作溶液。即配即用。

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406—2011

YC／T

5仪器设备

常用实验仪器及下述各项：

5．1高效液相色谱仪，配置柱温箱、梯度洗脱功能和紫外检测器。

5．2分析天平，感量0．1mg。

5．3振荡器，最大转速应不小于200r／min。

000

5．4离心机，最大转速应不小于8r／min。

5．5有机相滤膜，0．45pm。

6抽样

145．10

按照YC／T2003的规定抽取样品。

7分析步骤

7．1样品处理

称取2g(精确到0．1rag)试样于100mI。具塞锥形瓶中，准确加入50mL萃取溶剂(4．7)，用

150000

r／min振荡萃取10min。取3mL萃取液置于10mL具塞离心试管中，在5r／min条件下离心

10

min，取1

mL上清液过有机相滤膜(5．5)，滤液用高效液相色谱仪分析。

若待测试样溶液的浓度超出标准工作曲线浓度范围，则对样品前处理适当调整后重新测定。

7．2色谱条件

以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。

——c，8色谱柱，规格：填料粒径3．5／lm，250mm(长度)×4．6mm(内径)

——流动相A：0．1％的甲酸乙腈溶液(体积分数)；

——流动相B：0．1％的甲酸水溶液(体积分数)；

——柱温：35℃；

——流速：1．0mL／min；

——进样体积：10pL；

——梯度洗脱程序见表1；

——紫外检测器检测波长：A=393nm。

表1梯度洗脱程序

时间流动相A流动相B

rain％％

O3565

18．06535

23．O982

26．0982

27．03565

37．03565

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YC／T406—20

7．3标准工作曲线制作

按照色谱条件(7．2)测定标准工作溶液(4．8．3)，以马兜铃酸A浓度与响应峰面积绘制标准工作曲

线，工作曲线线性相关系数R2≥o．999。

标准工作溶液色谱图参见附录A中的图A．1。

每20次进样后加入一个中等浓度的工作标准溶液进行测定，如果测得值与原值的相对偏差超过

5％，则应重新进行标准工作曲线的制作。

7．4样品测定

按照仪器测试条件(7．2)测定试样(7．1)，每个样品平行测定两次。

典型样品色谱图示例参见附录A中的图A．2。

8结果的计算与表述

样品中的马兜铃酸A的含量由式(1)计算(计算结果应扣除空白值)

x一!!二鱼!丕!

，n

式中：

x——试样中马兜铃酸A的含量，单位为毫克每千克(mg／kg)；

c——标准工作曲线计算所得马兜铃酸A的浓度，单位为微克每毫升(／tg／mL)；

“——标准工作曲线计算所得空白样品中马兜铃酸A的浓度，单位为微克每毫升(ttg／mL)

y——试样萃取液定容体积，单位为毫升(mL)i

m——试样的质量，单位为克(g)。

取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果，精确至0．01mg／kg。

两次平行测定结果之间的相对平均偏差应不大于10％。

9回收率、检出限和定量限

本方法的回收率、检出限、定量限结果见表2。

表2方法的回收率、检出限和定量限结果

回收率检出限定量限

化合物

％mg／kgmg／kg

马兜铃酸A99．61～102．680．371．22

10试验报告一

试验报告应说明：

——识别被测样品需要的所有信息

——参照本标准所使用的试验方法

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YC／T

——测定结果，包括各单次测定结果及其平均值

——与本标准规定的分析步骤的差异；

——在测定中观察到的异常现象；

——试验日期；

——试验人员。

4

406--2011

YC／T

附录A

(资料性附录)

色谱图示倒

A．1标准工作溶液色谱图

标准工作溶液色谱图如图A．1所示。

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仉m

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图A．1标准工作溶液色谱图

A．2典型样品色谱图

典型样品色谱图如图A．2所示。

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图A．2典型样品色谱图

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