GB/T 22964-2008 河豚鱼、鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22964—2008

河豚鱼、鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、

红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、

吉他霉素、交沙霉素残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

Determinationoflincomycin,oleandomycin,erythromycin,tilmicosin,

tylosin,spiramycin,kitasamycinandjosamycin

residuesinfuguandeel—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

发布

GB/T22964—2008

前言

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：王飞、王海洋、曹彦忠、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。

T

GB/T22964—2008

河豚鱼、鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、

红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、

吉他霉素、交沙霉素残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉

素和交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉

素和交沙霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限:河豚鱼中的林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉

他霉素和交沙霉素均为2.0Mg/kgo鳗鱼中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素均为2.0pig/kg,

螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星均为5.0(ug/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD

3原理

河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素

的残留用Tris缓冲溶液提取后，经OasisHLB固相萃取柱"净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定容后，液相

色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1水：GB/T6682,—级。

4.2甲醇：色谱纯。

4.3乙酸钱。

4.4乙睛：色谱纯。

4.5盐酸。

4.6三轻甲基氨基甲烷(tris：C4HnNO3o

1)OasisHLB固相萃取柱是waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示

对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可便用这些等效产品。

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GB/T22964—2008

4.7氯化钙:CaCl2•2H2Oo

4.8甲醇溶液：2+3。400mL甲醇(4.2与600mL水混合。

4.90.01mol/L乙酸钱溶液：0.77g乙酸钱(4.3)溶解于水中，定容于1000mL容量瓶中。

4.10定容液：0.01mol/L乙酸钱溶液(4.9)+乙睛(4.4)(17+3)。

4.11tris溶液：称取12.0g三轻甲基氨基甲烷(4.6)、7.35g氯化钙(4.7)溶解于1000mL水中，用盐

酸(4.5)调节pH值为9。

4.12标准物质：林可霉素(CAS：7179-49-9、竹桃霉素(CAS：7060-74-4、红霉素(CAS：59319-72-1).

替米考星(CAS:108050-54-0)、泰乐菌素(CAS：74610-55-2)、螺旋霉素(CAS：8025-81-8)、吉他霉素

(CAS：1392-21-8).交沙霉素(CAS：16846-24-5和内标物质罗红霉素(CAS：80214-83-l,纯度耳95%。

4.13标准储备溶液I：1.0mg/mL。依次准确称取每种标准物质(4.12)适量，分别放入相应的10mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4€保存。

4.14标准储备溶液n：10.0Mg/mL0依次吸取0.1mL各标准储备溶液I(4.13),分别放入相应的

10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4C保存。

4.15标准工作溶液：2.0Mg/mLo依次吸取2.0mL混合标准储备溶液H(4.14),分别放入相应的

10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

4.16内标储备溶液：1.0mg/mLo准确称取10.0mg罗红霉素(4.12)于10mL容量瓶中，用甲醇溶

解定容至刻度，混匀。4°C保存。

4.17中间浓度内标溶液：10.0Mg/mL0吸取0.1mL内标储备溶液(4.16)于10mL容量瓶中，用甲

醇定容至刻度。4C保存。

4.18内标工作溶液：1.0Mg/mLo吸取1.0mL中间浓度内标标准溶液(4.17)于10mL容量瓶中，用

甲醇定容至刻度。

4.19基质标准混合工作溶液：

测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取1.0yL、2.0#L、5.0“L、25.0卩L标准工作溶液

(4.15),依次加入相应的试剂瓶中，再分别加入20.0内标工作溶液(4.18),用样品空白提取液定容

至1.0mL。配成林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素分

别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作

溶液。

测定鳗鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素各1.0“L、

2.0“L、5.0"、25.0卩L标准工作溶液(4.15)和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星各2.5“L、

5.0“L、10.0#L、25.0“L标准工作溶液(4.15),依次加入相应的试剂瓶中，再分别加入20.0ML内标

工作溶液(4.18),用样品空白提取液定容至1.0mLo配成林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素分别

为2.0ng/mL、4.0ng/mLJ0.0ng/mL^50.0ng/mL和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星分别

为5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作

溶液。

4.20OasisHLB固相萃取柱：500mg,6mL,或相当者。使用前，先后用10mL甲醇和10mL水活

化，在抽真空前的各步骤中，都保持柱体湿润。

4.21滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。

5.2天平：感量0.01g,0.0001go

5.3固相萃取装置。

5.4氮气浓缩仪。

5.5具塞聚丙烯离心管：50mLo

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GB/T22964—2008

5.6离心机：20000g离心力（或相当于12000r/min）o

5.7超声波清洗仪。

5.8pH计。

5.9振荡器。

6试样制备与保存

6.1试样的制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密

封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的

变化。

6.2试样的保存

将试样于一18C保存。

7测定步骤

7.1提取

称取5g试样，精确至0.01g,置于50mL离心管（5.5）中，加入20.0ML内标工作溶液（4.18）和

10.0mLtris溶液（4.11），于振荡器上剧烈振荡10mino以12000r/min转速离心10min,取上清液以

小于1.0mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱（4.20）。再加入10.0mLtris溶液（4.11）,于振

荡器上剧烈振荡10mino以12000r/min转速离心10min,取上清液以小于1mL/min的流速通过

OasisHLB固相萃取柱。

7.2净化

待样液全部流出后，先后用10mL水和10mL甲醇溶液（4.8）洗柱，弃去全部流出液，将固相萃取

柱用真空泵抽干1h。再用10mL甲醇（4.2）洗脱于15mL氮吹管中，用氮气浓缩仪于50C水浴中吹

至近干，准确加入1.0mL定容液（4.10）,于超声波仪中超声波助溶残渣。用阴性样品，按上述步骤制

备空白样品提取液。过0.2“m滤膜（4.21）后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液。

7.3测定条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱:AtlantisCia，内径3^m,150mmX2.1mm（内径）或相当者；

b）流动相A：乙睛；

c）流动相B：0.1%甲酸水溶液；

d）流动相C：甲醇；