DB51/T 3014-2023 家畜螨病诊断与防控技术规范

ICS11.220

CCSB41

DB51

四川省地方标准

DB51/T3014—2023

家畜螨病诊断与防控技术规范

Standardofdignositicandcontroltechniquesoflivestockacariasis

2023-02-07发布2023-04-08实施

四川省市场监督管理局发布

DB51/T3014—2023

目次

前言II

1范围3

2规范性引用文件3

3术语和定义3

4诊断3

5防治7

附录A（资料性）疥螨病临床症状8

附录B（资料性）痒螨病临床症状9

附录C（资料性）足螨病临床症状10

附录D（资料性）虫体形态学11

附录E（规范性）ELISA检测试剂配制和重组抗原制备13

附录F（规范性）PCR检测试剂配制与PCR扩增结果参考14

参考文献15

I

DB51/T3014—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。

本文件起草单位：四川农业大学。

本文件主要起草人：杨光友、古小彬、何冉、徐璟、谢跃。

本次为首次发布。

II

DB51/T3014—2023

家畜螨病诊断与防控技术规范

1范围

本文件规定了家畜螨病诊断与防控技术规范。

本文件适用于家畜螨病的诊断、检疫与防治。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T36195-2018畜禽粪便无害化处理技术规范

NY/T5030-2016无公害农产品兽药使用准则

中华人民共和国兽药典

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

家畜螨病livestockacariasis

由疥螨科（Sarcoptidae）的疥螨（Sarcoptesscabiei）和痒螨科（Psoroptidae）的痒螨（Psoroptes

ovis）、足螨（Chorioptes）寄生于家畜（牛、羊、猪、兔和马）皮肤所引起的外寄生虫病的统称。

3.2

疥螨病sarcopticmange

由疥螨（Sarcoptesscabiei）寄生于家畜皮肤表皮内引起相应的临床症状的外寄生虫病。

3.3

痒螨病psoropticmange

由绵羊痒螨（Psoroptesovis）寄生于家畜皮肤表面引起相应的临床症状的外寄生虫病。

3.4

足螨病choropticmange

由牛足螨（Chorioptesbovis）和德州足螨（Chorioptestexanus）寄生于家畜皮肤表面引起相应

的临床症状的外寄生虫病。

4诊断

4.1疥螨病、痒螨病和足螨病的临床症状

4.1.1疥螨病

家畜疥螨病多始发于宿主皮肤柔软、被毛短而少的部位，主要以剧痒，结痂，皮肤增厚和畜体消瘦

为主要临床特征，不同动物的发病部位存在差异（见附录A）。

3

DB51/T3014—2023

4.1.2痒螨病

家畜痒螨病多始发生于毛浓密的部位，主要以瘙痒，结痂，脱毛和畜体消瘦为主要临床特征，不同

动物的发病部位存在差异（见附录B）。

4.1.3足螨病

家畜足螨病多始发生于皮肤细嫩的部位，主要以瘙痒，结痂和患处脱毛为主要临床特征，不同动物

的发病部位存在差异（见附录C）。

4.2疥螨病、痒螨病和足螨病的显微镜镜检

4.2.1病料的采集

4.2.1.1疥螨病病料的采集

剪去患病部和健康部皮肤交界处的毛后，采用经火焰消毒后的小刀垂直于皮肤面用力刮取交界处痂

皮，直至刮处皮肤微有出血痕迹，将刮取物收集到容器内，待检。刮破处皮肤用碘伏等消毒剂进行消毒

处理。

4.2.1.2痒螨病病料的采集

用消毒小刀刮取患病部皮肤表面的痂皮，将痂皮收集到容器内，待检。取痂皮处皮肤用碘伏等消毒

剂进行消毒处理。

4.2.1.3足螨病病料的采集

用消毒小刀用力刮取患病部皮肤表面的痂皮，将痂皮收集到容器内，待检。取痂皮处皮肤用碘伏等

消毒剂进行消毒处理。

4.2.2显微镜镜检

4.2.2.1热源法

将4.2.1采集的病料放入平皿内，将平皿放入25℃～37℃的恒温箱中0.5h～1h后，将平皿置于显

微镜下检查。

4.2.2.2直接涂片法

将4.2.1采集的病料放置于载玻片上，滴加1滴5%甘油（丙三醇）水溶液，加盖另一新的载玻片，搓

压载玻片至病料散开，移去病料上方的载载片，加盖玻片后，置显微镜下检查。

4.2.2.3浓集法

当螨虫数量较少或病料采自死亡家畜时，可采用浓集法收集螨虫镜检。将4.2.1刮取的较多病料放

入10%氢氧化钠溶液并浸泡过夜或加热煮5min左右，待其溶液自然沉淀15min，取沉淀物镜检。或将上述

沉淀物转入试管中，再加入60%硫代硫酸钠溶液，试管口加盖玻片，静置5min～10min后，取盖玻片镜检。

4.2.3镜检结果判定

4.2.3.1病料中镜检到疥螨虫体或虫卵（见附录D.1），判定为显微镜镜检阳性。

4.2.3.2病料中镜检到绵羊痒螨虫体或虫卵（见附录D.2），判定为显微镜镜检阳性。

4.2.3.3病料中镜检到足螨虫体或虫卵（见附录D.3），判定为显微镜镜检阳性。

4

DB51/T3014—2023

4.3疥螨病和痒螨病的间接ELISA抗体检测

4.3.1材料准备

4.3.1.1试剂

碳酸盐缓冲液（0.05M,pH9.6）、PBS缓冲液（0.01M,pH7.4）、PBST缓冲液（0.01M,pH7.4）、

2M硫酸（2MH2SO4）、LB液体培养基的配制见附录E.1。

辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗：HRP-羊抗牛IgG，用于检测牛血清；HRP-兔抗羊IgG，用于检

测羊血清；HRP-羊抗猪IgG，用于检测猪血清；HRP-羊抗兔IgG，用于检测兔血清；HRP-兔抗马IgG，用

于检测马血清。

4.3.1.2阳性血清和阴性血清对照样品

疥螨阳性血清采自经显微镜镜检到疥螨虫体或虫卵的动物血清；疥螨阴性血清采自无疥螨流行史且

经显微镜镜检呈阴性的动物血清。

痒螨阳性血清采自经显微镜镜检到痒螨虫体或虫卵的动物血清；痒螨阴性血清采自无痒螨流行史且

经显微镜镜检呈阴性的动物血清。

4.3.1.3重组抗原制备

疥螨烯醇化酶重组抗原（rSar-Eno）和痒螨丝氨酸蛋白酶抑制剂重组抗原（rPsoc27）按照附录E.2

制备。

4.3.2操作步骤

4.3.2.1抗原包被

用碳酸盐缓冲液将抗原稀释到最佳浓度（rSar-Eno14.5μg/mL，rPsoc2746.0μg/mL）后加入96孔

聚乙烯板，每孔100μL，4℃包被过夜。次日，弃孔内液体，每孔加入PBST缓冲液300μL，洗板3次，每

次min，拍干。

4.3.2.2加封闭液

每孔加5%脱脂奶粉（W/V，5g脱脂奶粉+100mLPBS）300μL，37℃封闭1.5h。弃孔内液体，洗涤同4.3.2.1。

4.3.2.3加血清样品

每孔加入用PBS缓冲液稀释的待检血清100μL（rSar-Eno以1:640倍稀释；rPsoc27以1:100倍稀释），

每板同时设置标准阳性血清对照孔、标准阴性血清对照孔以及空白（稀释液）对照孔。37℃温育1h后，

弃孔内血清，洗涤同4.3.2.1。

4.3.2.4加酶标二抗

用PBS缓冲液将辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗稀释至推荐工作浓度，加入100μL，37℃温育1h。

弃孔内液体，洗涤同4.3.2.1。

4.3.2.5加底物显色

每孔加入底物TMB（3,3’,5,5’-四甲基联苯胺）溶液100μL，37℃避光温育20min。

4.3.2.6终止反应

5

DB51/T3014—2023

每孔加入2M硫酸（H2SO4）50μL终止反应，20min内用酶标仪测定结果。

4.3.2.7ELISA检测结果判定

以空白孔调零，用酶标仪测定450nm的吸光值（OD450值），若阳性对照OD450值/阴性对照OD450值的比

值大于2.1,则实验结果成立。P为待检血清孔OD450值，N为阴性对照孔OD450值，以P/N≥2.1判为阳性，

P/N<2.1判为阴性。

4.4疥螨病的PCR检测

4.4.1材料的准备

4.4.2试剂

1×TAE缓冲液（见附录F.1）；微量基因组DNA提取试剂盒；DL2000DNAMarker、灭菌ddH2O、2×TaqPCR

MasterMixII；GoldViewII核酸染料。

4.4.2.1对照样品和待检样品

通过热源法从4.2.1.1采集的疥螨病病料中分离获得疥螨虫体，按微量基因组DNA提取试剂盒的说明

书方法提取疥螨虫体的基因组DNA，从而获得疥螨DNA阳性对照样品。

采用4.2.1.1方法采集病料获得待检样品。

4.4.3DNA提取

将4.4.2.1的待检样品放入预冷的研